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질문 luciferase assay
알dreamjw0211(대학생)  |  11.12 17:25
제가 control vector 두가지를 transfection 했는데요
두 벡터는 비슷한 size 한 벡터에서 유래된 것입니다
그런데 firefly 값이 4배 정도 차이나게 나왔습니다
control vector는 거의 비슷하게 나와야 될꺼같은데 왜 그런지 모르겠어요 renilla값은 두 벡터가 비슷했습니다
왜 그럴까요 ㅜㅜ
도와주시면 감사하겠습니다
#Transfection
 
#luciferase
 
#firefly
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

두 벡터의 정보가 아래 한 문장으로는 부족합니다.

이 정보만 가지고는 조언을 드리기 어렵습니다.

좀 더 구체적으로 설명해 주셔야 할 것 같습니다.

 

'두 벡터는 비슷한 size 한 벡터에서 유래된 것입니다'

뒷다리hcp074  |  11.13 09:55  

orignal vector와 original vector에 flag tagging한 vector

이렇게 두개의 vector인데 luciferase 값이 달라요 ㅜㅜ 

알dreamjw0211  |  11.15 17:15  

luciferase activity를 통하여서 특정 transcription factor의 활성을 보고 계신건지요?

만약 그렇다면,

1. 공벡터

+ 보고자 하는 transcription factor에 의해 activation 되는 firefly luciferase vector

+  renilla를 발현하는 vector

2. 공벡터에 flag sequence만 추가한 vector (flag 이외에 다른 단백질을 발현하지는 않는 vector)

+ 보고자 하는 transcription factor에 의해 activation 되는 firefly luciferase vector

+  renilla를 발현하는 vector

이렇게 두 종류의 transfection을 진행한 cell의 renilla luciferase activity는 유사한데, firefly luciferase 측정 결과가 4배 차이난다는 질문이신건지요?

 

각 luciferase assay의 측정치가 얼마였는지요?

 

특정 단백질 발현에 의하여 renilla의 luciferase activity 측정치가 영향을 받는 경우는 매우 흔한데 (이런 경우에는 renilla 대신 beta-gal이 좀 더 안정정입니다), firefly의 luciferase activity 값이 변하는 것은 특정 transcrition factor가 activation 되었다고 밖에 볼 수가 없겠네요..

 

뒷다리hcp074  |  11.18 16:38  
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