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질문 bradford assay 의 실험자 간의 오차는 어디까지일까요?
올챙이클레엉(대학원생)  |  11.12 16:48

안녕하세요? bradford assay 에 대해 궁금한 것이 있어서 질문글을 남겨봅니다.

저희 연구실에서는 protein 정량시 bradford를 이용해 하고 있습니다. 저희 연구실에서 정제하여 사용하는 단백질이 있는데,  해당 단백질을 정제 후 사용할 만큼 aliquot 해서 두는데, 해당 단백질의 bradford assay 가 사람마다 굉장히 다르게 나오는 것을 보았습니다.

다른 친구 손에서는 정량 시 1.1ug/ul 이 나오는 것이 제 손에서는 2.2ug/ul 씩 나오고 있습니다. 해당 단백질을 정량 시 저 말고도 다른 사람이 했을 떄 약 1.8ug/ul 정도가 나오더라구요. 제가 그린 standard graph 는 R^2=0.998 이었고, duplicate으로 진행하였으며,  다른 친구들이 그린 standard 도 못해도 R^2 값이 0.995 정도는 나왔습니다. 그냥 단백질이 균일하게 섞이지 않았던 것일까요? 그렇다 하더라도 같이 정제된 단백질이 이 정도로 차이가 날 수 있나요?

#bradford
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

하나의 aliquot을 해동해서 여러명이 분석해서 차이가 난다면 개인간 인적 오차로

봐야 할것 같고 다른 aliquot을 사용했다면 개인간 인적 오차 + 시료의 불균일성

이 주요 원인일 것 샅습니다.

대왕개구리SPEED  |  11.12 16:52  

같은 sample로 같은 시각에 정량을 진행해 봐야 사람간 차이가 얼마나 있는지 정확히 알 수 있을것 같습니다.

단백질을 냉장실에 보관하는 것만으로도 농도가 변할 수 있기 때문입니다.

뒷다리hcp074  |  11.13 09:57  
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