실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
Real time PCR 관련 질문
레벨2 잠시만... (과기인)
제가 real time pcr을 수행 중인데 언젠가 부터 증폭이 제대로 되지 않는 것 같아서 질문 드립니다.
대표적인 GAPDH 결과를 올렸구요. (첨부파일 확인)
우선 dissociation curve가 지글 지글하고, amplification curve 역시 이상하네요.
results 를 확인해 보면 Tm 값이 지나치게 높게 나오는 것 같고,
cDNA는 합성해서 순도확인하면 1.8 이상은 다 나옵니다.
Annealing temperature는 60도로 설정해서 40번 돌린 결과입니다.
primer Tm값은 모두 60도입니다.
결과가 왜 이모양으로 나올 까요?
뭐가 문제일까요?
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