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질문 western 진행시 1차 항체 냉장에서 3시간해도 괜찮나요?
알zzi(대학원생)  |  2019.11.11 14:20

western 진행중입니다

평소 1차 항체 냉장에 오버나잇 시키는데 급한일이 있어 transfer 후, TBST buffer에 담궈 냉장보관한 뒤 다음날 bloking 후 실험 진행할 예정입니다

 

원래 실험실 프로토콜은 1차 항체 냉장 오버나잇인데..그렇게하면 시간이 너무 길어질 것 같아서요..

상온에서 1~3시간 한다고는 했는데,  재사용하는 항체라 상온에서 했다가 항체가 변질될까봐 걱정되어서요.

 

혹시 냉장에서 오버나잇 안하고 3시간정도해도 똑같나요?

#western
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 |  2019.11.11    

2% Sodium azide를 1st Ab에 넣으면 상함 방지됩니다~

개구리애니  |  2019.11.11   

3시간이면 충분합니다. 상온 3시간 해도 변질은 안 됩니다.

불안하시면 셀컬쳐용 페니실린 스트렙토마이신을 적당량 넣으시면 변질을 막을 수 있습니다.

대왕개구리SPEED  |  2019.11.11   

냉장 3시간은 Ag가 많으면 가능할 것 같으나 시간이 조금 모자랄 수도 있습니다.

그리고 sodium azide(antifungal), spreptomycin(antimicrobial)을 넣어도 미생물이나

곰팡이 오염은 방지가능하지만 구조적인 변성은 방지할 수 없습니다.

2번째 사용이라면 별 걱정하지 않아도 될것 같습니다.

뒷다리hcp074  |  2019.11.13   

WB에서는 보통 4'C overnight과 상온 2h을 비슷한 정도로 생각합니다.

가끔 4'C overnight을 해야만 signal이 나오는 antibody도 있긴 합니다만, 보통은 위와 같이 혼용해서 실험을 해도 무방합니다.

Ab는 일반 단백질들 보다는 상온에서 보관해도 쉽게 변하지는 않습니다.

 

알안녘  |  2019.11.15   

상온에서 보통 2시간, 3시간 정도 붙이고 있는데 문제 없이 잘 하고 있씁니다

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