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질문 세포를 너무 빨리 동결시켜버렸습니다..
알쥬굴(일반인)  |  11.10 12:58

안녕하세요,

제가 급하게 세포를 얼려야 해서 세포를 바이알에 분주한 후 냉동실에 30분정도 얼린 후(완벽하게 얼지 않았습니다.) 바로 액체질소에 넣어 얼려버렸습니다.

 

cell line 마다 다르다고 하지만 세포를 바로 액체질소에 동결하면 세포 손상이 엄청나게 크게 와서 다 죽어버린다고 해서 많이 걱정이 됩니다..

 

세포 얼릴 때 FBS 20%, DMSO 10%로 해서 얼려서 혹시나 FBS 성분으로나마 손상이 덜 가지 않을까 하지만 그래도 급속동결이기 때문에 걱정이 됩니다..

 

이 방법이 맞지 않을거란 것 알기 때문에 방법을 여쭙고싶습니다.

조언 부탁드립니다.,ㅠ

#세포동결
 
#동결보존
 
#cell freezing
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

음.. 일단 먼저 말씀드리자면,  cell을 바로 액체질소에 동결하면 cell 손상이 되는 것은 사실입니다.

하지만 vial에 소분한 후 냉동실에서 약 30분동안 둔 후 동결한 것이 운이 좋다면 cell에 손상이 안됐고 잘 동결 되었을 것이고 아닌 경우에는 cell을 다시 소분하여 냉동하셔야 겠네요.

FBS 20% 성분으로 cell의 손상을 완벽하게 막을 수 있다고 보는 건 저는 좀 어렵다고 봅니다..

올챙이하춘화마타타  |  11.11 10:36  

동결시켰던 stock을 다시 풀어 보세요...

또 stock에서 세포 생존율이 없다면 재 동결을 해야겠죠...

현 상황에서는 어찌 도리가 없네요...

셀 동결을 할때 freezing tank라는 제품들이 있습니다. 이런 제품을 이용하시면 생존율을 높일수 있습니다.

대왕개구리안재진  |  11.11 13:26  

솔직하게 말씀드리면, 

원래 원칙상 딥프리저에 먼저 보관한 뒤,

액질에다가 옮겨야 하는 것이 맞습니다.

하지만, 제가 한번 실험을 해 보았습니다.

하나의 cells 을 2 vials 로 나눠 하나는 바로 LN2에 넣고, 하나는 기존 방식대로

-70 도씨에 얼려 LN2로 옮겨 봤을때,

세포 생존에 따라 비교해봤을 경우 그렇게 많이 차이는 나지 않았습니다.

제가 얼린 cells 은 T cells 입니다.

너무 걱정 안해셔도 될 듯 합니다.

다만, 너무 급하지 않은 이상,

원래 하던 방식대로 하시길 권장합니다.

개구리지나가는사람  |  11.11 14:43  

그리고, 세포 동결시

 

아래 제품을 사용합니다.

upload_image

너무 고가이긴 하나, 일반 media에 dmso를 넣어 얼리는 것 보단 확실히 더 좋습니다.

개구리지나가는사람  |  11.11 14:45  

오히려 냉동 상태로 오래 두는 것이 안 좋습니다.

냉동 상태로 일주일 이상 두면, cell viability가 많이 떨어집니다.

 

뒷다리hcp074  |  11.13 10:31  
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