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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Western blot에서 stacking과 running gel의 경계에서 발생하는 문제
알Neuromage(과기인)  |  2019.11.07 03:46
첨부파일 파일첨부: unnamed.jpg (979 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요.

박사과정입니다만 western blot에 문제가 있는 것 같아 선배님들의 조언을 청합니다.

최근 들어서 계속 발생하는 현상인데 gel을 만들어서 달리면

Band가 stacking gel과 running gel의 경계에서

뒤틀리면서 옆 레인으로 번지는 것 같은 현상이 생깁니다. 

 

결과에 미치는 영향은 확실하지는 않은데

보려는 단백질에 따라서 어떤 때는 잘나오고 어떤 때는 이상합니다.

아무튼 깨끗한 결과를 얻는데 방해가 되는 것은 분명한 것 같습니다. 

 

원래 gel을 전날 만들어서 냉장보관해서 쓰다가

이번에는 당일 아침에 바로 만들어서 썼는데도 이 모양이네요.

다른 걸 개선해 볼 수 있는게 있을까요?

어떤 조언이든 감사히 받겠습니다.

감사합니다. 

 

#Western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2019.11.07   

항상이런가요? Bio-rad kit이면 2개 블럭으로 4장을 내릴수 있잖아요.

4장모두 그런가요?

제가 보기에는 젤 플레이트가 꽉 눌리지 않아서 (느슨해서) 발생하지 않나 합니다.

4장 보두 그렇다면 젤 만들때 케스터부터 서로 다른 블럭에서 한곳만 그렇다면 블럭 잡아주는 부분... 등 원인이 있을것 같네요...

대왕개구리강시  |  2019.11.07   

tracking dye는 well의 모양대로 내려가지 않습니다.

well에서 빠지기 시작하면 옆으로 퍼지면서 dye가 일자형태로 모든 well이 다 연결된 것처럼 보입니다.

보기에 별로 이상하지는 않습니다.

대왕개구리안재진  |  2019.11.07   

강시님?

젤 내리면서 running gel 상단에서 lane이 겹치는데 괜찮은건가요?

한참 내려오면 겹치는게 일반적이지만 저 윗쪽에서도 겹치는건 좀 이상한거 아닌가요?

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