실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
HepG2 cell에서 Free Fatty Acid를 통한 지방간 유도 실험 질문
레벨1 혼자랩 (대학원생)
안녕하세요 저는 대학원에 재학중인 석사입니다.
다름이 아니라 Free Fatty Acid를 Liver cancer cell line인 HepG2 cell에 처리하여 지방간을 유도하는 실험을 진행중인데 분명 Oil Red O imaging 실험을 진행하면 Free Fatty Acid를 처리한 Well이 더 빨갛게 나와서 Lipid Accumulation이 일어났다는 것은 잘 나오는데 Western Blotting과 q-PCR을 통해서 Lipogenesis gene인 SREBP, FAS, SCD 등과 b-oxidation gene인 PPARa, CPT-1등에서 변화가 나타나지 않습니다. 다른 논문들을 찾아봤을 때는 Free Fatty Acid를 통해서 HepG2에 지방간을 유도했을 시에 Lipogenesis와 b-oxidation gene에 변화가 있다고 나오는데 왜 안나오는지 모르겠습니다...ㅠ 혹시 제프로토콜에 문제가 있거나 HepG2 cell에 지방간유도를 실험해보신 경험자분 계시면 도움좀 부탁드립니다....ㅠ
Protocol
1. 6-well plate에 20x10의 4승 개로 Cell을 깐다.(F/D 배지 사용(DMEM+FBS+Antibiotics)
2. 1~1.5 day정도 키운다.
3. DMEM에 Oleic acid 0.66mM + Palmatic acid 0.33mM을 넣은 배지로 갈아준다.( 여기서 OA는 PBS에 6.6mM OA+NaOH 0.01M+BSA 10%, PA는 PBS에 3.3mM PA+ NaOH 0.01M을 넣은 스탁을 사용하여 각각 DMEM에 10배씩 희석해서 비율로 넣어준다.) 총 1mM의 Free Fatty Acid 첨가하는 셈
4. 위 배지에서 약 1~2일 정도 Cell을 키운다.
위 방법에 혹시 문제가 되는 점있거나 조언해주실 부분이 있다면 답변 부탁드립니다....ㅠㅠ
(추가로 혹시 Oleic acid나 Palmatic acid를 기존에 랩에 있는것을 사용하엿는데 Cell Lipid Accumulation용 Fatty acid가 있다면 답변 부탁드립니다.....ㅠ)
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