실험 Q&A Immunology > ELISA
sandwich ELISA 결과에서 양성, 음성혈청 OD값에 차이가 없어요.
레벨1 아하아하 (일반인)
돼지혈청 속에서 타겟 단백질에 대한 antibody만 detection하고 싶습니다. 이쪽으로 배운 적은 없지만 저의 이론적 생각을 바탕으로 sandwich ELISA 실험을 했습니다.
1. 제가 원하는 타겟 단백질에 대한 monoclonal antibody from mouse를 coating하고 washing 후 5% skim milk in PBST로 blocking
2. Washing 후 여러 단백질이 섞여있는 용액을 분주(여기서 타겟 단백질만 mAb에 붙을 것으로 예상)
3. Washing 후 실험하고자 하는 돼지혈청을 1:100으로 희석하여 incubation (돼지혈청 속 타겟 단백질에 대한 antibody만 붙을 것으로 예상)
4. Washing 후 HRP-conjugated anti-swine from goat 사용
5. Washing 후 substrate는 TMB solution, stop soluton은 H2SO4 사용
같은 타겟 단백질이 코팅된 시판 ELISA kit로 돼지혈청을 먼저 test 했고 양성, 음성혈청으로 나눈 후, 위와 같이 실험해서 detection 한 결과 양성, 음성혈청 간에 차이가 없이 OD값이 0.25 정도로 같았습니다. Blank는 제대로 나왔구요. 이 실험에서 무엇이 문제인지 아시는 분 있다면 답변 부탁드립니다ㅜㅜ
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