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procollagen ELISA kit 질문입니다..
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안녕하세요. 표피 각질형성세포주인 HaCaT 으로 procollagen 발현량 측정 실험하는 중입니다.
여러 논문을 참고해 24well plate에 well당 10만개의 세포를 배양하고 24시간 배양한 후 media를 serum-free 인 것으로 교체하여 다시 24시간 배양한 후 배양액을 수거해 실험에 이용했습니다.
procollagen 은 Takara사의 MK-101 제품을 이용하였고 수거한 배양액을 1200rpm에서 3분간 원심분리해 세포를 제거한 나머지를 실험에 이용했습니다.
kit 설명서대로 진행했는데 문제는 standard가 정상적으로 찍히는데 실험군은 procollagen detection이 아예 안됩니다. standard의 0ng/mL 값이랑 똑같아요.
kit 설명서에 high sensitiviy protocol이 있길래 이것도 해봤는데 역시 안되네요...
혹 같은 세포주에서 실험을 해보신 분이 있으시면 조언 부탁드립니다. HaCaT 에서 procollagen을 측정한다는게 이제 안믿길 정도로 자신감이 떨어져있어요..ㅠㅠ (만약 검출에 성공하신 분이 있으시면 실험 protocol 을 알려주세요! 제 것과 비교해보게요..)
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