실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > DNA Modification
플라스미드에서 프로모터와 타겟 사이의 거리
레벨5 플라스미도 (대학생)
안녕하세요. 대학원들어와서 Molecular Biology 하는 사람 아무도 없는 랩에서 gene editting을 맡게된 학생입니다..
다름이아니라 최근에 플라스미드 관련해서 다루다보니깐 ( 현재까지는 다른 랩에서 기술을 가져오고, 제가 중간 중간 공부하면서 찾아보고 있는 상태입니다 ) gene과 promoter 사이의 거리가 있는데 그 거리에 대한 정보를 찾아보고싶은데 찾아 보는 방법을 몰라서 이렇게 글을 쓰게 되었습니다.
제 질문은 일단 두개 인데요..
1. 현재 제가 한 plasmid를 Addgene에서 받아서 쓰려고 하는데 promoter로 mini-TK promoter가 쓰이고 뒤에 ruciferase가 붙어있습니다. 그 사이에 59bp가 끼워져 있구요. 제가 ruciferase를 땐다음에 다른 지놈을 붙이려고 하는데 restriction enzyme site가 59bp 중간 서열 사이에 32번째에 위치하여 있습니다. 제가 이 부분을 자른다음에 다른 gene을 붙여도 발현에 문제가 없을까요?아니면 over-hang으로 프라이머 제작시 32번째 뒤에서열을 다 만들어준 후에 붙여야 할까요..?
2. Promoter와 발현부분 중간의 bp는 정해져 있는건가요? 만약 그렇다면 그것을 볼 수 있는 사이트가 있을까요..?
제가 연구실에서 혼자 cas9이랑 over-expression같은 기술을 배웠다보니 어디다가 도움을 요청하기가 어렵습니다. 학부졸업하고 이제 연구실 생활 시작인데 무거운 짐을 맡았지만 최선을 다해 공부하고 싶습니다. Molecular cloning 책을 사고 싶지만 너무 비싸서 살 수 없어서... 여기저기 알아보다보니 지식도 얕은 수준입니다.
한 가르침 주신다면 정말 감사하게 받겠습니다.
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