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유전자 실험에 사용하는 tube나 도구는 모두 멸균을 하는 것이 좋습니다.
그리고 단순히 mRNA를 추출 하는 것이 아니라 개체 별 mRNA 변화량을
비교하는 것이라면 조직 파쇄 후 연속으로 mRNA 추출을 하는 것을 권장
합니다.
DNA라면 어느정도 안정하지만 RNA는 세포가 죽고나서 빠르게 분해되거나
해서 양이 변하기 때문에 측정한 mRNA의 변화량에 유의성이 안나올수가
있습니다.
하지만 시료를 버리지 말고 앞의 질문을 보니 RNA 추출이 잘 안되는것 같던데
RNA 추출 실험 연습용으로 사용 해보는 것은 어떻겠습니까?
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레벨3
닉네임0115
(대학원생)
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19.10.20 14:58
여러 번 시도 끝에 RNA가 잘 추출되는 것 같은 방법을 찾았어요! 사용하는 buffer를 바꿔서요..! 감사합니다! 새 sample 파쇄해서 해야겠어요~
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레벨3
닉네임0115
(대학원생)
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19.10.20 15:19
항상 많은 도움 받고있어서 너무 감사한데 하나만 더 질문해도 될까요?ㅠㅠ
RNA를 뽑았는데 260/230 값이 낮게 나오는 것은 시약 washing이 제대로 되지 않아서라고 하던데,
제가 생각하기에 이전 실험과 이번 실험에 달랐던 것은 centrifuge할 때 시간이 줄어든 것 밖에 없거든요..ㅠㅠ(이전에는 제가 실수로 protocol에 15s씩 centrifuge하라는 것을 1분씩 했고 이번에는 시간 지켜서 20~30s씩 했어요) 혹시 이것때문에 시약이 충분히 날아가지 않을 수도 있는지요..ㅠㅠ정말 감사합니다!
washing 단계에서 원심분리는 1분이상 해도 괜찮습니다.
항상 3분 정도하고있는데 짧은 것 보다는 긴 것이 좋지만 5분 이상은 하지 않아도
무방 할것으로 보입니다.
washing은 2번하면 충분하며 30초 정도 원심분리 했다면 2번째 washing 후
elution 전에 공기중에서 cap.을 열어 5분정도 dry하고 나서 elution하면 좋습니다.
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레벨3
닉네임0115
(대학원생)
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19.10.21 08:52
감사합니다! 이번엔 잘 안되었지만 다음에 할 때는 조금 더 신중하게 해봐야겠어요ㅠㅠ많은 도움 주셔서 감사합니다!