실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
Porous membrane 위에서 ez-cytox로 세포 생존도 정량분석이 적합한 방법인가요?
레벨1 김아무개씨 (대학생)
세포 기르는 공간의 면적을 조금 조절을 해야 해서 transwell에서 membrane(pore size:0.4um)을 조금 잘라서 insert를 손수 다시 제작했습니다.
그리고 거기서 세포를 1주일 배양하고 viability를 정량적으로 보려고 ez-cytox를 처리했습니다.
물론 새로 만든 insert아래에 배지는 다 제거해 빈상태로 세포에만 ez-cytox를 처리했습니다.
첫주에 했던 프로토콜 그대로 두째주에도 똑같이 시딩하고 배양해서 흡광도를 찍을 때도 똑같은 방법으로 ez-cytox를 처리했습니다.
같은 주 샘플 내에서도 편차(9%편차)가 어느정도 있긴 했었지만 똑같은 조건과 프로토콜로 진행한 첫주와 두째주 샘플은 흡광도 평균이 너무 상이하게 나왔습니다(두째주 흡광도 값은 첫주의 80%).
새로만든 인서트가 잘못됐을 수도 있지만 용액이 밖으로 새는 현상은 없었습니다.
애초에 porous membran 위에서 ez-cytox를 처리하는 게 잘못됐다는 생각이 드는데 고수 분들의 생각은 어떠신지요..
제 생각이 맞다면 Membrane 위에서 반드시 배양해야하는 상황에서 어떤 방법으로 정량적인 viability assay를 해야 할까요?
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