[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
2019 Bio Top5 인터뷰
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 1177  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 잎 RNA 추출 질문드립니다ㅠㅠ
알닉네임0115(대학원생)  |  2019.10.17 17:51

안녕하세요! 저는 딸기 잎으로 실험하려고 하는 대학원생입니다..

딸기 잎에서 RNA를 추출하고 있는데요, kit를 이용해 추출하고 있는데 잘 되지 않아 질문드립니다.

1학기 때 딸기 잎 지금 시료보다 약간 어린 잎으로 RNA 잘 추출했었는데요, 지금 하려니까 잘 안되어서 이게 실험 과정에서의 문제인지, 아니면 잎에서 RNA를 추출할 때는 다른 과정(과실 등보다는 fiber나 그런 것들이 많으니까요..?)이 더 필요해서 그런 것인지 도움 요청드립니다ㅠㅠ

추출은 Qiagen 사의 Rneasy plant mini kit를 사용하고 있고 protocol과 똑같이도 해보고 RLT buffer incubation 시간도 늘려보고 하였는데 추출이 되지 않습니다.ㅠ

nano drop으로는 20~70ng 정도라고 잡히는데 전기영동에서는 검게만 보이고 아예 안 보이는 것으로 보아 아예 추출이 안 된 것 같아요ㅠㅠ

혹시 비슷한 경험 있으신 분 미리 답변 감사드립니다!

#RNA 추출
답변하기
검색광고 검색광고
[필코리아] NEB(New England Bio labs)한국총판 필코리아에서 주문하세요!
NEB (New England Bio labs) 한국총판 필코리아입니다. 저렴하고 빠른 배송으로 고객의 연구비와 시간을 절약해드립니다. 전국 어디서나 주문하세요. T:02-2105-7020, F:02-2105-7025, mail: info@philekorea.co.kr
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.10.17   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

갖아 중요한 단계는 식물 조직을 잘 grind를 해야 합니다.

그 다음 RLT를 넣고 5분 정도만 incubation 후 강하게 vortex를 해야지 추출 수율이

올라갑니다.

알닉네임0115  |  2019.10.18   

답변 감사합니다! 조금 더 신중을 기해서 다시 해보아야 겠어요ㅠㅠ

그런데 RLT를 넣고 vortexing을 하고 incubation을 하나요 아니면 incubation을 하고 vortexing을 하나요?

대왕개구리SPEED  |  2019.10.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

incubation, 5min -> 강한 vortex 또는 2번 반복하면 됩니다.

강하게 vortex할 수록 RNA 추출에 좋습니다.

알닉네임0115  |  2019.10.18   

정말 감사합니다!

개구리지나가는사람  |  2019.10.23   

방법 하나 알려드리겠습니다.

 

1. 액체질소에 딸기 잎을 동결한다.

2. 막자와 막자사발로 잎을 갈아준다.
   - 갈아주는 동시에 액체질소를 계속 보충 (액체질소가 있는 상태에서 갈아줌)
   - 가장 중요한 것은, 완전히 고운 분말이 될때까지 충분히 갈아주셔야됩니다.

3. 분말처럼 갈린다음, 액체질소를 조금 보충 후, Trizol 및 Easy blue 등 RNA 추출 용액을 1ml 을 넣습니다.

4. 1ml 을 넣으면 사탕 처럼 굳습니다(얼음), 그상태에서 한번 더 파우더처럼 계속 갈아줍니다. Trizol 첨가 후부터는 액체질소 첨가 하지 않습니다.

5. 그리고, 계속 갈아주다보면, 다음과 같은 상태 변화가 일어납니다.

   파우더 --> 녹은아이스크림처럼 액체화 --> 액체

6. 액체가 되면 E.tube에 옮겨 다음 스텝으로 진행하세요~

 

잎사귀 뿐만아니라 조직에서도 이와같은 방법으로 RNA 뽑는 것이 가능합니다.

 

답변하기
할인행사 광고 검색광고
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf New 25mL Conical Tubes : 혁신적인 디자인과 다양하고 편리한 사용 (4.1까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
2/6  좌우
28,00027,000
162,500154,000
81,30077,000
53,70051,000
51,50049,000
415,400395,000
98,90094,000
242,400230,000
217,600207,000
39,40037,000
80,40076,000
153,100145,000
107,900103,000
120,900115,000
406,000386,000
75,40072,000
178,700170,000
37,60036,000
50,00048,000
136,000129,000
264,400251,000
671,700638,000
98,10093,000
77,20073,000
최근등록   더보기 >
transformation할때 재조합이 잘 안 됩니다....   01.25
cre-lox system에 관해서 궁금한 것이 있습니다.   01.25
국내에 실험도구 수리하는곳이 있을까요?   01.24
dextran sodium sulfate 제조   01.23
western blot 시 denaturated protein에 antibody가 어떻게...   01.23
EMT6 세포주 분양 요청드립니다.   01.23
LPS와 샘플 병용처리시 일어나는 cell death   01.23
suspention cell U937 알려주세여~   01.22
세포의 최소 배양조건이 있을까요?   01.22
mouse xenograft tumor tissue FACS   01.22
데일리파트너스
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS