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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 880  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 잎 RNA 추출 질문드립니다ㅠㅠ
알닉네임0115(대학원생)  |  10.17 17:51

안녕하세요! 저는 딸기 잎으로 실험하려고 하는 대학원생입니다..

딸기 잎에서 RNA를 추출하고 있는데요, kit를 이용해 추출하고 있는데 잘 되지 않아 질문드립니다.

1학기 때 딸기 잎 지금 시료보다 약간 어린 잎으로 RNA 잘 추출했었는데요, 지금 하려니까 잘 안되어서 이게 실험 과정에서의 문제인지, 아니면 잎에서 RNA를 추출할 때는 다른 과정(과실 등보다는 fiber나 그런 것들이 많으니까요..?)이 더 필요해서 그런 것인지 도움 요청드립니다ㅠㅠ

추출은 Qiagen 사의 Rneasy plant mini kit를 사용하고 있고 protocol과 똑같이도 해보고 RLT buffer incubation 시간도 늘려보고 하였는데 추출이 되지 않습니다.ㅠ

nano drop으로는 20~70ng 정도라고 잡히는데 전기영동에서는 검게만 보이고 아예 안 보이는 것으로 보아 아예 추출이 안 된 것 같아요ㅠㅠ

혹시 비슷한 경험 있으신 분 미리 답변 감사드립니다!

#RNA 추출
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

갖아 중요한 단계는 식물 조직을 잘 grind를 해야 합니다.

그 다음 RLT를 넣고 5분 정도만 incubation 후 강하게 vortex를 해야지 추출 수율이

올라갑니다.

대왕개구리SPEED  |  10.17 20:05  

답변 감사합니다! 조금 더 신중을 기해서 다시 해보아야 겠어요ㅠㅠ

그런데 RLT를 넣고 vortexing을 하고 incubation을 하나요 아니면 incubation을 하고 vortexing을 하나요?

알닉네임0115  |  10.18 09:06  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

incubation, 5min -> 강한 vortex 또는 2번 반복하면 됩니다.

강하게 vortex할 수록 RNA 추출에 좋습니다.

대왕개구리SPEED  |  10.18 10:21  

정말 감사합니다!

알닉네임0115  |  10.18 11:38  

방법 하나 알려드리겠습니다.

 

1. 액체질소에 딸기 잎을 동결한다.

2. 막자와 막자사발로 잎을 갈아준다.
   - 갈아주는 동시에 액체질소를 계속 보충 (액체질소가 있는 상태에서 갈아줌)
   - 가장 중요한 것은, 완전히 고운 분말이 될때까지 충분히 갈아주셔야됩니다.

3. 분말처럼 갈린다음, 액체질소를 조금 보충 후, Trizol 및 Easy blue 등 RNA 추출 용액을 1ml 을 넣습니다.

4. 1ml 을 넣으면 사탕 처럼 굳습니다(얼음), 그상태에서 한번 더 파우더처럼 계속 갈아줍니다. Trizol 첨가 후부터는 액체질소 첨가 하지 않습니다.

5. 그리고, 계속 갈아주다보면, 다음과 같은 상태 변화가 일어납니다.

   파우더 --> 녹은아이스크림처럼 액체화 --> 액체

6. 액체가 되면 E.tube에 옮겨 다음 스텝으로 진행하세요~

 

잎사귀 뿐만아니라 조직에서도 이와같은 방법으로 RNA 뽑는 것이 가능합니다.

 

개구리지나가는사람  |  10.23 17:32  
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