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결과물이 없기 때문에 질문해주신 내용으로만 추론해서 답변을 드리면,
1. Cell 자체에서 해당 단백질을 만들어내지 않는 경우, (다른 논문이나 다른 결과물을 참고해서 확인해보시면 알 수 있습니다.)
2. 1st or 2nd Ab에 문제가 있는 경우, 2nd Ab의 경우 다른 1st Ab와 사용했을 때 문제 없었다면 1st Ab에 문제가 있는 경우 입니다. (희석비율을 조절하거나 새로운 Ab를 사용하시기 바랍니다.)
3. ECL solution의 문제가 있는 경우, (이 문제 역시 다른 Ab는 잘 나온다면 ECL solution에는 문제가 없습니다.)
4. 드물지만 Gel이 제대로 만들어지지 않으면, Westenblot에서 band가 약하게 나타나거나 안나오는 현상이 있다고 합니다. (acrylamide pre-mix solution에 문제가 있을 가능성이 높습니다.)
위 경우들을 확인해보시기 바랍니다.
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레벨1
믜묘먀묘
(대학원생)
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19.10.17 17:00
감사해요!!
membrane은 TBS-T에 담그고 일주일 후에 detection해도 잘 나옵니다.
윗 댓글에서 잘 말씀에 주셨는데 혹시 2nd ab reaction할 때 1st ab와 호스트 맞춰서 넣으셨나요? 간혹 실수로 host 바꿔서 넣는 경우가 있어서요.
membrane stripping하고 다시 antibody detection 해보세요.