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질문 IP용 antibody의 reactivity 질문입니다~
알박해피(과기인)  | 2019.10.14 10:56

HA Tag antibody를 구매하려고 합니다.

WB용 protein의 항체가 anti-mouse라서

IP pull-down 항체를 anti-rabbit으로 선택했는데요..

이 항체의 reactivity가 all이라고 합니다.

이럴 경우에 WB로 확인 시 heavy, light chain이 더 진하게 나올까요?

아니면 all이여도 상관없나요?

#IP
 
#HA-Tag
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알DolphinKirina  |  2019.10.14   

보통 안티바디의 reactivity 라고 한다면 같은 단백질을 가지고 있는 다른 종의 단백질을 동시에 디텍할 수 있는지를 확인하는 것입니다.

쉽게 말하면 actin 같은 단백질을 species 간 homology 가 높기 때문에 human, mouse, rabbit 모두 한종류의 anti-actin antibody 로 잡을 수 있기 때문에 reactivity 에서는 human, mouse, rabbit, pig, horse 이렇게 표기 됩니다

하지만 HA 는 human Influenza virus hemagglutinin (HA) 에서 특정 아미노산 서열을 가져와서 immunogen 으로 사용한 것입니다. human, mouse, rabbit 어디에도 없는 virus 에서 유래했기 때문에 이 아미노산 서열은 외부에서 도입시켜 준 exogenous protein 을 "Tagging" 하는 목적으로 사용할 수 있는 것입니다. 그래서 reactivity 는 all 이라고 기재되어 있는 것 같습니다. 

질문자는 아마 source 와 reactivity 를 혼동하고 있는 것 같습니다.

HA immunogen 을 사용한 host (antibody source) 는 IP 할 때 mouse 에서 생산한 것을 사용했고 WB 할때에는 rabbit 에서 만든 antibody 를 사용한다는 전략은 매우 좋습니다. WB 할 때 사용하는 anti-rabbit-HRP 는 IP 할 때 사용한 anti-HA-(mouse IgG) antibody 를 원리적으로는 디텍할 수 없을 것이기 때문입니다.

 

도움이 되었으면 좋겠습니다.

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