실험 Q&A > Buffer/Reagent
lysozyme buffer사용에 따른 흡광도
레벨2 쩜수니 (대학원생)
안녕하세요.
미생물이 분비하는 펩티드 독소 관련 연구를 하고 있는 대학원생입니다.
분리한 균주들이 병원성에 따라 알파 및 베타 타입으로 나누고 있는데,
쉽게 알파타입은 배양상징액 처리시 적혈구를 용혈시킬 수 있으나, 베타 타입은 그렇지 않습니다.
이에, 균주가 독소를 생성하기는 하지만 균체 밖으로 분비할 수가 없어서 병원성의 차이가 나타나는지를 확인하기 위하여, lysozyme을 이용한 실험을 수행하려고 합니다.
여기에서, lysozyme buffer 성분에는 20 mM Trisma-HCl, 2 mM EDTA, 1% Triton X-100이 들어가게 되는데, Triton X-100은 detergent라서 아마도 이 성분 자체만으로 적혈구를 용혈시킬 수 있을 듯합니다. 이 성분을 buffer 성분에서 빼도 cell lysis에는 영향이 없는지요?
또한, 저의 실험에서는 lysozyme을 처리하여 균주체를 lysis한 후, 그 액을 적혈구를 포함한 반응용액에 다시 첨가하여 용혈활성을 측정하게 됩니다. 이는 흡광도의 감소로 확인을 하고 있는데, lysis된 균체(cell debris)를 반응용액에 넣어주면 뿌옇게 되어 흡광도에도 영향을 끼칠것 같아 그전에 filtering이나 혹은 다른 방법으로 뿌옇게 되는 것을 없애줄 방법이 있는지요?
평소 bric사이트의 실험Q&A란을 자주 보게 되는데, 실험을 시작함에 있어 너무 막막하여 여쭈어 봅니다.
감사합니다.
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