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 전체 > Cell Biology > Transfection
조회 753  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Stable cell line제작시 protein 발현 질문
알에효효(대학원생)  |  10.10 17:05
안녕하세요 졸업할 때 까지 stable cell하곤 관련 없을 줄 알았는데 어쩌다 만들어야 하는 석사생입니다.
DNA vector를 transfection해 stable cell line을 만들게 되었는데요. 제가 제작한 construct는 transfection하고 24시간 째 강하나 48시간 째 급격히 떨어지는 특징을 가지고 있습니다.
발현이 지속되지않는 특징을 가지는데 stable을 위해 거진 한달가까이 키우는데 protein 발현이 제대로 될까 싶어서 질문해요.
Protocol이 있는거 보면 그러지 않으니까 있지싶지만 궁금합니다~
#Stable cell
 
#Transfection
 
#DNA vector
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

CRISPR같은 KO plasmid가 아니라 Mammalian cell에서 Overexpression이나 shRNA cell line이 목적이신가요?

일반적인 plasmid transfection에의한 mammalian cell에서의 발현은 genome integration이 일어나지 않기 때문에, 영구적이지 않습니다. 시간의 경과할수록 내부 plasmid의 분해+세포의 분열 등으로 인해 점점 발현이 사라지게 됩니다.

그렇기때문에 Stable cell line(mammalian) 을 만들기 위해 genome-integration을 일으키는 Retrovirus나 Lentivirus를 많이 이용합니다. non-viral method로는 Transposon계 plasmid(대표적으로 Piggybac) 를 이용하는 방법도 있습니다.

개구리무광  |  10.13 06:34  
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