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 전체 > Cell Biology > Transfection
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질문 Stable cell line제작시 protein 발현 질문
알에효효(대학원생)  |  2019.10.10 17:05
안녕하세요 졸업할 때 까지 stable cell하곤 관련 없을 줄 알았는데 어쩌다 만들어야 하는 석사생입니다.
DNA vector를 transfection해 stable cell line을 만들게 되었는데요. 제가 제작한 construct는 transfection하고 24시간 째 강하나 48시간 째 급격히 떨어지는 특징을 가지고 있습니다.
발현이 지속되지않는 특징을 가지는데 stable을 위해 거진 한달가까이 키우는데 protein 발현이 제대로 될까 싶어서 질문해요.
Protocol이 있는거 보면 그러지 않으니까 있지싶지만 궁금합니다~
#Stable cell
 
#Transfection
 
#DNA vector
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리무광  |  2019.10.13   

CRISPR같은 KO plasmid가 아니라 Mammalian cell에서 Overexpression이나 shRNA cell line이 목적이신가요?

일반적인 plasmid transfection에의한 mammalian cell에서의 발현은 genome integration이 일어나지 않기 때문에, 영구적이지 않습니다. 시간의 경과할수록 내부 plasmid의 분해+세포의 분열 등으로 인해 점점 발현이 사라지게 됩니다.

그렇기때문에 Stable cell line(mammalian) 을 만들기 위해 genome-integration을 일으키는 Retrovirus나 Lentivirus를 많이 이용합니다. non-viral method로는 Transposon계 plasmid(대표적으로 Piggybac) 를 이용하는 방법도 있습니다.

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