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질문 Jurkat transfection 실험
알ㅎㅅㅎ;;(대학원생)  |  2019.10.01 18:32

안녕하세요.

현재 transfection을 처음 시도하고 있는 학생입니다.

jurkat cell 및 T사의 jurkat cell 용 transfection reagent를 이용하여 transfection 진행하고 있습니다.

plasmid DAN 2.5 ug씩 넣어주고 transfection reagnet와 충분히 섞어준 후 jurkat cell (750000cells/well, 6 well plate)에 drop-wise로 떨어뜨려주었습니다.

그리고 현재 24시간 정도 incubation 진행하였는데 지금 보니 jurkat cell들이 거의 다 바닥에 붙어있더라구요.... 혹시 jurkat cell을 이용하여 transfection 해보신 분들 이런 경우가 있나요..??

아니면 제가 transfection하는 과정에서 무언가 실수한 것이 있을까요...

 

그리고 또 한가지 질문은 jurkat cell line의 경우 suspension cell인데 selection 시에 어떤 식으로 하시는지 알려주실 고수님 계신가요!!

제가 조사한 바로는 soft agar colony formation assay를 약간 변형시켜 0.3% agarose (final con.)를 이용하여 colony의 형성을 확인하더라요..

혹시 이 방법이 맞는지, 아니면 사용하시는 다른 방법들이 있는지 알려주시면 매우매우매우 감사하겠습니다!!!

#jurkat
 
#transfection
 
#selection
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알푸르사리  |  2019.10.16   
Jurkat cells
Transfection: electroporation (>90%)
Transduction: lentivirus (>95%)

바닥에 붙어 있다는게 adherent cell처럼 붙어있지 않고 single layer로 자라고 있어 파이펫으로 쉽게 떨어지면 정상입니다.

Selection 방법은 넣어준 DNA의 종류에 따라 달라서 적어주신 내용으로는 답변하기가 어렵네요
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