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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 3M배지와 agar plate를 이용해 미생물 생장을 확인하는 데 질문드립니다.
알dbwn7819(대학원생)  | 2019.09.23 10:37

안녕하세요! 미생물 생장 확인에 관해 질문드리려 합니다.

저의 샘플은 우유이고 멸균유가 아닌 UHT살균유이기 때문에 미생물이 아예 존재하지 않는 샘플은 아니라고 생각합니다.

저는 이 우유에 유당을 분해하는 효소를 처리하고 그 때의 미생물 생장을 확인하고 있습니다.

 

효소는 제가 분리, 정제한 것이 아닌 상업용 효소를 사용하고 있고

효소를 처리하여 우유를 냉장온도 및 상온에 보관하며 미생물 생장을 확인하려고 합니다.

제가 예전에 질문올린적이 있는데 pour plating방법을 진행했었고, 우유의 색이 워낙 뿌옇기 때문에 배지의 색이 변화하여 colony세는 데에 어려움이 있을뿐더러 실험에 워낙 미숙하다보니,

PCA agar plate를 만든후 샘플 100ul를 접종하는것, 그리고 샘플 1ml를 3M 일반세균용 petri film에 접종하는것으로 실험법을 변경하게 되었습니다. 

살균우유를 개봉한 직후,  원액을 PCA agar plate에 도말하게 되면(100ul spreading), 우유의 지방성분 때문인지 배지위에 뿌연게 남으면서 도말이 되는데 이것이 혹시 미생물 생장에 방해가 될까요? 

100ul를 접종하여 plate를 3반복하여 까는데도 미생물colony가 아예 뜨지 않아서 고민인데, 이는 유효한 colony가 없고 colony가 검출되지 않았다고 판단을 하면될지... 잘 모르겠습니다. 

왜냐하면, 9시간이 경과한 후 까지 살펴보았을 때도 원액이나 10^1, 10^2에서도 colony가 전혀 뜨지 않기도 하고, 가끔 딱 한두개씩 뜨는 경우가 있어 어떤문제로 인해 실험이 안되고 있는지 판단이 안서기 때문입니다....

제가 미숙하다보니 Agar plate에 spreading하는 방법만으로는 부정확할 것이라 생각하여 3M 일반세균용 petri film도 같이 사용하게 된것인데, 

우유를 20도에서 6시간, 9시간 두었을 때도 3M배지까지 colony가 뜨지 않아서 고민입니다. 보통 상온에서 우유를 둘경우 미생물이 조금이라도 자라는 게 일반적이라고 생각하는데, 제 실험에 어떠한 문제가 있어 이런현상이 나타나는건지 잘 모르겠습니다... 

혹시 우유원액을 3M배지에 접종하는 것이, 뿌연 시료이기 때문에 실험이 제대로 안될 수 있나요?

제가 며칠 전 냉장온도와 상온이 아닌 30도, 40도에서 우유를 둔 후 Agar plate에 도말하였을 때에는 우유 원액, 10^1에서 아무 colony도 안뜨던 게 10^2에서 Bacillus와 유사한 colony가 떴습니다.. 저는 vortexing을 전부 다 잘 해주었고 원액도말 시 원액이 담긴 삼각플라스크를 잘 휘저어준 후 진행하는데도 이 문제가 왜 일어나는지 모르겠습니다.. 

혹시 이 글만으로 실험자체를 파악하시기 어려우셔서 답변하기 곤란하시다면 wait-ing@nate.com 메일주소로 연락주시면 다 말씀드리겠습니다 ..ㅠㅠ

도움 부탁드립니다. 감사합니다. 

#일반세균
 
#colony counting
 
#PCA agar
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2019.09.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

네... 고민이 많으시겠어요...
먼저... 시험법 validation을 진행해보세요...

시료인 살균우유와 일반세균을 섞어 (100CFU/ml)정도로... 플레이팅을 진행해보세요..
그리고 세균이 배양된다면 시험법은 문제 없는것입니다...

또 실험자의 시료가 살균처리 되어 있지만 세균이 있을것이라 가정하고 있는데...
살균처리 되어 원래 균이 없는 시료로 실험을 하고 있을수도 있습니다...
때문에 일반세균(100CFU/ml)을 섞고 살균처리를 진행하여 살균처리 전후를 비교해 보시는것도 한 방법이 될수 있습니다.

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