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capture 항체는 0.5ml PBS에 녹이라고 되어 있네요.. (항체가 동결건조 되어 있는 상태로 보입니다.)
그리고 carrier protein이 없는 PBS에 워킹 농도로 희석을 하고 웰당 100ul씩 분주해서 사용합니다. 희석농도는 C of A에 표기 되어 있을듯 하네요...
elisa 1판 기준이면 capture ab는 최종 10ml 조금 넘게 만들어지는게 정상입니다...왜냐면 100ul씩 96well로 최소 9.6ml 이상 필요하니까요...
O/N이 지나면 aspiration 하고 washing buffer로 3번 워싱을 하라고 되어 있네요...
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레벨1
Q.E.D.
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19.09.23 16:09
제가 위 제품을 사용해 보지는 않았지만
BD와 RnD제품을 이용해서 직접 코팅을 해서 ELISA를
진행하기에 답변을 드립니다.
위 시트는 그냥 일반적인 과정을 정리해 둔 거구요
따로 해당 Capture antibody 라던가
Standard 의 농도가 적혀있는 종이가 있을꺼에요
만약 없다면 실험을 지금 하지 말고 해당 회사
학술팀이나 본사에 연락을 해서
농도값이나 처리 비율을 꼭 받아야 합니다
보통 BD사 제품들은 capture antibody들이 다 녹아있는데
이건 직접 녹여야 해서 500ul의 pbs를 사용하라는 거구요
그 녹인 제품을 가지고 1:250이라던가 하는
희석을 해서 그걸100ul/well 당 처리를 해서
o/n을 해서 하기에 꼭 확인하고 진행하세요^^
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레벨1
Q.E.D.
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19.09.23 16:13
그리고 팁을 드리자면 저건 상온에서
O/n을 하고, 나중에 washing 을 하라고 되어있는데
상온인 25도가 아니라 4도에서 더 효울이 좋고
16시간인 o/n이 아니라 24시간 코팅을 해 주고
코팅 후에는 워싱은 하지 말고
아주 완전하게 털어 준 후 blocking단계로 넘어가는게
ELISA코팅이 잘 됩니다.
그럼 수고하세요