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 전체 > Immunology > ELISA
조회 3239  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 ELISA 질문입니다. (형광)
뒷다리감사합니다!(대학생)  |  09.19 21:14

fibroblast와 keratinocyte에서 ELISA kit를 통해 Procollagen type 1의 secretion을 보려고 합니다. 

그런데, fibroblast에서는 흡광도 값이 잘 나오지만, keratinocyte에서는 흡광도 값이 너무 낮아서 정량을 할 수 없습니다... 스탠다드의 0 pg/ml 농도의 값과 비슷하게 나옵니다.

샘플 미디어 양을 늘려도 비슷합니다.

이런 경우에는 어떤 조치를 취해야 하나요? capture, detection antibody 시간을 늘려야 하나요?

혹시 흡광도로 구하는 게 아닌 형광을 이용해서 측정할 수 있는 방법은 없나요? 어디서 보기론 형광이 흡광도보다 더 적은 양을 detection할 수 있다고 했는데 ELISA에서 이를 이용할 수 있을지 궁금합니다..

해결법 주시면 감사하겠습니다..

#ELISA
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

keratinocyte에서 target protein의 발현이 낮아서 확인이 안되는 것 아닐까요?

sampling 시에 sample을 더욱 농축할 수 있게, incubation하는 media 양을 줄인다던가 해볼 수 있을 것 같네요. (예를 들어 2 mL에 sampling 하였다면, 동일한 cell 수에 media를 1 mL로 줄여 sampling...)

detection antibody에 HRP가 아닌 fluorescence가 붙어 있는 항체를 사용한다면 형광으로 확인 할 수있겠지만,,  개인적인 생각에 형광은 흡광도 측정법보다 background가 심한 것 같다는 생각이 듭니다.

알이예이  |  09.20 03:57  
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