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칼슘이온이 cell wall의 LPS inner core에 결합 및 cell membrane의 인지질에
결합하는 시간이 필요합니다.
결과적으로 정상적인 대장균에 칼슘이온을 처리하면 cell wall과 membrane의
구조가 상당히 약화됩니다.
cell wall에 결합한 칼슘은 TF 시키는 DNA의 neutralization 및 LPS 안으로
쉽게 이동시키는 역활을 하며 cell membrane의 인지질에 결합한 칼슘이온은
DNA가 cell 안으로 쉽게 들어오게 합니다.
증식을 억제하기 위해서예요. Competent cell의 성능은 생장곡선의 단계와 세포 밀도에 따라 엄청 달라집니다. 원래 의도했던 단계에서 생장을 완전히 정지시키기 위해서 저온으로 내리는 겁니다.
CaCl2 용액에서 대장균을 실온에서 보관해도 자라지 않습니다.
저온에서 보관하면서 CP cell을 만드는 것은 균의 성장을 억제하기
위하 것이 아니라 satble하게 CP cell을 만들기 위해서 입니다.
동일 균 농도로 실온 및 ice에서 CP cell을 만들어 plasmid를 TF 한번
해 보세요.
절차마다 쉬는 건 그렇네요.
잘 생각해 보지 않았던 주제인데 하나 배웠습니다.