실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
전기영동 SDS-PAGE시 샘플
레벨1 aasqss (대학원생)
안녕하세요. 대학원생입니다..
SDS-PAGE 내릴때 샘플준비하는데서 문제를 겪고있습니다.
인슐린의 monomer, dimer, trimer 등을 보려고
인슐린이 들어있는 시료 15 uL와 샘플버퍼 5 uL (2-mercaptoethanol 안넣음) 섞어서 100도에 5분간 끓인 후 18% SDS-PAGE에 내렸습니다.
내린후 coomassie blue로 염색해서 결과를 확인했는데, 3개 lane 중 1개 lane에서 밴드모양이... 완전 물결모양으로 이상하게 나왔습니다.
끌림현상도 존재하였고요... ㅠ.ㅠ 정말 요동을 치더라구요.
그래서, 여쭤보고싶은게
시료 준비할때 끓인 후 ICE에서 식힌뒤에 전기영동을 하 기전에 보면
로딩샘플이 깔끔하지않고 살짝 침전되는게 보였습니다. 부유물같은거..?
그래도 그걸 다 섞어서 그대로 로딩해서 내렸었거든요..
왜냐면 인슐린이 중성조건에서 용해도가 낮아서 침전되는게 보였기 때문에..
그래서 그냥 그걸 그대로 내렸었는데, 여기서 문제가 생긴걸까요?
하지만, stacking gel에 걸려서 내려오지 못한 단백질은 없는것으로 확인되었어요.
염색후 그 경계쪽에 염색된 단백질이 없었거든요..
조언 부탁드릴게요.
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