[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 5841  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 전기영동 SDS-PAGE시 샘플
알aasqss(대학원생)  |  2019.09.18 17:36

안녕하세요. 대학원생입니다..

 SDS-PAGE 내릴때 샘플준비하는데서 문제를 겪고있습니다.

인슐린의 monomer, dimer, trimer 등을  보려고 

인슐린이 들어있는 시료 15 uL와 샘플버퍼 5 uL (2-mercaptoethanol 안넣음) 섞어서 100도에 5분간 끓인 후 18% SDS-PAGE에 내렸습니다. 

내린후 coomassie blue로 염색해서 결과를 확인했는데, 3개 lane 중 1개 lane에서 밴드모양이... 완전 물결모양으로 이상하게 나왔습니다. 

끌림현상도 존재하였고요... ㅠ.ㅠ 정말 요동을 치더라구요.

 

그래서, 여쭤보고싶은게

시료 준비할때 끓인 후 ICE에서 식힌뒤에 전기영동을 하 기전에 보면

로딩샘플이 깔끔하지않고 살짝 침전되는게 보였습니다.  부유물같은거..?

그래도 그걸 다 섞어서 그대로 로딩해서 내렸었거든요..

왜냐면 인슐린이 중성조건에서 용해도가 낮아서 침전되는게 보였기 때문에..

그래서 그냥 그걸 그대로 내렸었는데, 여기서 문제가 생긴걸까요?

하지만, stacking gel에 걸려서 내려오지 못한 단백질은 없는것으로 확인되었어요.

염색후 그 경계쪽에 염색된 단백질이 없었거든요..

 

조언 부탁드릴게요.

 

 

#인슐린
 
#SDS-PAGE
 
#coomassie
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.09.18   

인슐인 pI는 5.4 ~ 6.7이기 때문에 정제된 insulin을 pH6.8 buffer에 넣으면 침전

될 가능성이 있지만 SDS-PAGE sample buufer에 들어있는 SDS때문에

pI와 관계없이 - charging되어 침전되지 않습니다.

그리고 침전된다 하더라도 시료 중에 포함된 인슐린 농도가 눈에 보일

정도가 되나요?

따라서 100도에서처리 후 침전된 단백질은 인슐린이 아닐겁니다.

열 변성으로 인하여 침전된 물질은 원심분리 후 제거하고 전기영동하면

됩니다.

변성되어 침전되는 단백질은 upper gel 안으로 들어갈수 없기 때문에

전기영동 후 염색해도 gel에서 확인이 안됩니다.

전기영동 사진을 봐야지 정확한 원인을 알수 있을것 같습니다.

답변하기
할인행사 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
nanoString Panel Discount Promotion (~6월15일까지)!!! (6.16까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Reading과 형광 Imaging을 하나의 장비로 한 번에!! [Multi-mode mic.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
5/6  좌우
109,00098,100
49,00041,700
6,0005,100
924,000
493,000443,700
482,000433,800
739,000702,100
339,400322,500
52,60050,000
370,000333,000
482,000433,800
17,00014,500
66,50063,200
136,000129,200
870,000
47,20044,900
468,000421,200
92,30087,700
23,00019,600
125,500119,300
93,20088,600
79,50075,600
773,000734,400
139,000132,100
최근등록   더보기 >
NCBI에서 Annotation이 완료된 경우   06.05
Taq polymerase와 pfu polymerase   06.05
MTT protocol DMSO concentration   06.04
ELISA 실험 시 side well의 흡광도가 높아지는 이유?   06.04
akt   06.04
생명공학 관련 장기 실험 주제 추천해주세요   06.04
ctab buffer 제조시 edta 관련하여 질문드립니다.   06.04
western blot stripping 질문드립니다 ㅠㅠ   06.04
한달째,,수득률계산하기---   06.04
HPLC 이동상 phosphate buffer   06.04
라이카코리아
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크