실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
ion exchange chromatography capacity 계산
레벨2 강영임 (대학생)
현재 antibody를정제하고 있습니다.
Affinity chromatography에서 어느 정도 정제 후에 cation exchange를 하려고 합니다. 참고로 제 sample 분자량은 90kDa정도 되고, PI는 8.5 정도입니다.
column은 GE HiTrap SP-HP 5ml을 사용하려고 하고
buffer는 20mM sodium phosphate, pH7.0을 사용하려고 합니다.
처음 60mg/L의 cell culture media를 affinity (protein A)를 하고 나니 335mg/L 농도의 fraction 16ml을 얻었고 이를 다시 cation exchage (GE HiTrap SP-HP 5ml)를 수행하려고 하는데 ion capacity를 잘 모르겠어서 찾아보니
-CH2CH2CH2SO3가 charged group이고 ion capacity는 0.15~0.2mmole H+/ml resin이라고 합니다.
잘 이해가 되지 않아서 GE에 물어봤더니
55 mg ribonuclease/ml gel.
Buffer solution:
0.1 M sodium acetate, pH 6.0
Flow rate:
1 ml/min
다고 하는데 이런 data를 받아도 이해가 되지 않습니다.
좀 차근차근 설명해 주세요
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