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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 Bio-Rad의 Econo glass 컬럼 사용해주신 분 있으신가요?
뒷다리졸업은언제하나(대학원생)  |  09.17 17:06

안녕하세요^^

저번에 대장균 클로닝, 발현으로 문의를 여러번 드렸던 대학원생입니다.

많은 분들의 도움도 받고 특히 SPEED님 덕분에 발현실험까지 하였는데요,

아쉽게도 실험하고있던 서열이 현재 진행하고있는 환경에서는 발현이 거의 안되고 있음을 확인하여서..ㅠㅠ

다른 서열로 교체해서 클로닝 하고 발현을 진행중입니다.

다행히 변경한 서열은 small scale로 발현 후 SDS, WB로 확인하여 발현이 되고있음을 확인하였습니다^^

 

이제 large culture를 진행하고있는데,

발현하고자하는 target protein에 His tag이 있어서 Ni-NTA 레진으로 정제를 하려고 합니다.

컬럼에 레진을 채워넣고 샘플을 메뉴얼로 흘리는 방법으로 정제를 먼저 진행할 예정인데요..

(LC를 이용한 정제도 추후에 진행할 것을 생각하고 있습니다.)

 

연구실에서 사용하는 레진은,

Bio-rad Nuvia Ni-NTA resin과 Qiagen의 Ni-NTA superflow 레진 두 가지 회사 제품을 보유하고 있습니다.

 

오픈컬럼으로 정제하는 방법 말고,

연구실에 glass이 있어서 펌프나 주사기 시린지로 밀어내려서 정제하려고 하는데 glass 컬럼 사용법이 따로 없어서요..

 

사용하고자하는 컬럼은 Bio-rad의 Econo glass chromatography 컬럼입니다.

(https://www.bio-rad.com/ko-kr/sku/7370512-econo-column-chromatography-columns-0-5-10-cm?ID=7370512)

 

제가 궁금한 것들은

1. glass 컬럼에 레진을 흘려넣고 사용 후 재 사용을 위해서 다시 레진을 수거하는 방법 (보관하여 추가 사용 하려함)

2. 여러번 사용하여 레진을 버린 후 컬럼에 새로운 레진을 채워넣어도 되는지, 가능하다면 부가적인 워싱과정이 필요 없는지, 컬럼에서 레진을 수거할 때 방법..

3. 오토클레이브가 가능하다는데, 일반적인 대학 연구실에서 사용하는 오토클레이브 진행하면 되는 것인지

4. 컬럼 밑에 껴있는 porous polymer bed support (필터같은 하얀 것)은 교체가 안되는 것인지?

 

 

레진 사용법은 사용 메뉴얼을 참고하면 되는데,

컬럼 자체의 메뉴얼이 없어서 문의드립니다.

 

감사합니다.

#글라스컬럼
 
#컬럼
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. glass 컬럼에 레진을 흘려넣고 사용 후 재 사용을 위해서 다시 레진을 수거하는 방법 (보관하여 추가 사용 하려함)

: CV가 적은 경우는 피펫으로 레진을 보관용 bottle로 옮기면 되고

CV가 많으면 컬럼을 뒤집어 보관용 bottle로 레진을 넣고 버퍼로 몇회

씻어서 bottle로 넣으면 됩니다.

예비 실험에는 많은 CV로 실험하지 않아도 됩니다.

2. 여러번 사용하여 레진을 버린 후 컬럼에 새로운 레진을 채워넣어도 되는지, 가능하다면 부가적인 워싱과정이 필요 없는지, 컬럼에서 레진을 수거할 때 방법..

: 보통 레진은 계속 recharging해서 사용합니다.

새 레진을 넣으면 binding buffer로 평형화를 시킨 후 시료를 loading하면

됩니다.

레진 수거는 1에 설명했습니다.

3. 오토클레이브가 가능하다는데, 일반적인 대학 연구실에서 사용하는 오토클레이브 진행하면 되는 것인지

: 저는 단백질 정제에 사용하는 10종 이상의 레진을 autoclave해서 사용해본

적은 없습니다.

4. 컬럼 밑에 껴있는 porous polymer bed support (필터같은 하얀 것)은 교체가 안되는 것인지?

: Econo cloumn을 사용해본 경험으로 보면 교환이 안되지만 사용 중 막히는

경우는 별로 없습니다.

support를 오랫동안 사용하려면 support위에 탈지면을 얇게 올리고 사용하면

거의 10년 이상 사용가능합니다.

대왕개구리SPEED  |  09.17 17:22  

언제나 항상 감사드립니다 SPEED님^^

 

정제 전에 처리하야할 문제가 있어서, 아직 진행하지 못 하였는데

 

정제할 때 알려주 것 참고해서 진행하겠습니다.

 

감사합니다!^^

뒷다리졸업은언제하나  |  09.25 14:46  
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