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항쿼럼센싱 억제율 비교 방법과 바이오센서 ATCC 12472 특성 질문
레벨1 미녕 (대학생)
안녕하세요. 고등학교 소논문 활동으로 균 배양실험을 처음하여 지식도, 경험도 부족해서 어려운 부분이 생겨 도움을 구해봅니다.. 도와주세요...
저희의 실험과정을 간단히 소개하자면 이러합니다.
논문주제 : 감초추출물의 농도에 따른 항쿼럼센싱 효과 비교
1. 감초추출물 제작 : 증류수를 바탕으로 감초가루 양을 조절해 0.5mg/ml, 1mg/ml, 1.5mg/ml 추출물을 제작.
2. 구강균을 입에서 채취해 LB배지에 streaking 하여 항온기에 30도로 24h 배양, C. violaceum ATCC 12472(동결건조상태)를 액체배지 5ml에 접종하여 항온기에 30도로 48h배양. (구강균은 37도가 가장 잘 자랄테지만 항온기가 하나여서 ATCC 12472의 조건에 맞출 수 밖에 없었습니다.. 또한 12472 배양이 하루로는 부족한 듯 하여 2일동안 배양하였습니다.)
3. streaking한 구강균의 단일클로니를 따 액체배지에 배양. (30도, 24h)
4. 구강균의 쿼럼센싱 확인 : 구강균과 ATCC 12472가 든 액체배지를 각각 2ml씩 섞어 2개의 LB배지에 1ml씩 분주하고 spreading, 항온기 30도 24h
5. 배지에 보라색 색소가 형성된 것으로 보아, 구강균이 쿼럼센싱 신호를 보내는 것이 맞다. (ATCC 12472는 바이오센서 역할을 하며, 쿼럼센싱신호를 감지하면 보라색 색소를 형성하는 특성이 있다고 함.)
6. spreading 했던 LB배지에 4개의 우물을 파 세 곳에 농도가 다른 감초추출액을 담고 한 곳은 증류수를 대조군으로 모두 0.5ml씩 넣는다. 항온기 30도 24h
7. 투명하고 ATCC 12472의 보라색 색소가 억제된 구역이 감초추출액이 쿼럼센싱을 억제한 구역이다. 지름을 비교한다.
1) 질문 드리고 싶은 점은 ATCC 12472가 제가 알기로는 구강균과 같이 한 균에 대해 쿼럼센싱 신호를 감지한다고 알고 있었습니다. 그런데 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6521156/ 이 관련 논문을 읽어보니 구강균 같은 다른 균 없이 ATCC 12472 단독으로 사용하여 실험했더군요. 하지만 또 다른 논문을 찾아보니 http://www.ndsl.kr/ndsl/search/detail/article/articleSearchResultDetail.do?cn=JAKO201511059258338 식중독균을 사용한 실험이 있었습니다. "ATCC 12472가 다른 균의 쿼럼센싱 신호를 감지해 보라색 색소를 형성한다."는 특성에대해 위와 같은 두 논문에서 무엇이 옳은지, 혼란스럽습니다.
2)실험과정 7의 결과로 사진과 같이 나왔는데, 실험과정에서 우물을 깔끔하게 파지 못해서 감초추출물을 넣을 때 온전히 담기지 못하고 주변으로 스며들었습니다.. 원 모양의 억제구역을 기대하고 지름을 재려 했으나 어려울 것 같고 이러한 경우에 억제율을 비교할 수 있는 방법이 있을까요? 재실험을 할 여유가 없어 막막합니다..
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