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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 sds page후 염색해도 투명합니다
알실험초보1(대학원생)  |  2019.09.15 14:14
첨부파일 파일첨부: 1568524489127.jpg (119 KB)
이미지 첨부파일
western blot 시 구입한 정제된 단백질을 걸어서 gel에 잘 내려가는지 확인하고 싶어서 transfer하기 전에 염색을 해봤습니다.
그런데 단백질의 위치로 추정되는 부위만 염색이 안됩니다..
왜 그런걸까요? 단백질이 많으면 색이 매우 진하고 밴드가 두꺼워야하는데 왜 투명하게 밴드가 생기는 건가요?

정말 답답합니다ㅠ 혹시 아시는 고수님들 계시면 알려주세오ㅠ
(20ul = 10ul Laemilli + 단백질 0.5ug + 나머지는 RIPA buffer)로 하여 20ul을 걸었습니다.
사진은 gel을 coomassie로 5분 염색한 뒤에 약 5분씩 3번 워싱한 결과입니다
#sdspage
 
#gel electrophoresis
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2019.09.16   

마커가 걸린건가요?

현재 염색이 너무 짧아서 다른 단백질도 잘 안보이는것 같은데... 메이드된 염색 시약을 사용하시나요? 아니면 만들어서 사용하시나요?

염색을 길게하면 어떨까합니다.

현재 젤을 다시한번 염색을 진행해보세요... 2~3시간 진행하면 염색이 될것 같습니다.

대왕개구리SPEED  |  2019.09.16   

SDS-PAGE 사진은 밑에 A4를 놓고 찍으면 gel 상태를 확인하기 편합니다.

혹시 전기영동 BPB line이 어느 위치인가요?

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