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질문 protein buffer change
뒷다리시은(대학원생)  |  2019.09.10 15:14

혹시 여기 계신 분들 중에서 단백질 정제를 진행할때 어떤 buffer를 사용하고 계신가요?

 

전에는 media로 많이 진행을 했는데 최근에는 PBS나 Tris buffer,  grade water로 진행해야 하는 일이 생겼습니다.

 

혹시 PBS나 tris buffer,  grade water로 buffer change를 할경우에 protein이 aggrigation이나 degradation이되는 경우가 있나요..?

 

#protein
 
#buffer
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대왕개구리안재진  |  2019.09.10   

생체처리를 진행한다면 Tris 계열보다는 Phosphate buffer쪽으로 가는게 독성면에서 유리합니다. 단순 물은 단백질 안정화에 좋지 않구요...

또 단백질 안정화에 요구되는 킬레이터 혹은 cofactor를 같이 넣어주는 방법도 고민이 요구됩니다.

그렇지만 보통 무슨 버퍼를 이용했냐 물어 보시면 전 대부분 PSB를 이용했습니다.

시은  |  2019.09.10    

최근의 대부분 PBS로 buffer change를 진행했습니다만 이상하게 SDS PAGE를 내리게 되면 band의 분리가 제대로 일어나지 않고 내려오는게 이상해서 정량이 힘들어 질문드리게 되었습니다...

이전에 질문을 적었을대 답변이 PBS에 있는 Nacl정도로는 크게 영향이 없다고 되어 있었는데 저희가 진행할때는 PBSsample이 하나라도 있으면 조금 내려오는게 이상해 졌습니다....혹시 PBS로 bufferchange한 protein을 SDSPAGE를 내려보신적이 있으신지요?

 

요즘은 PBS를 조금 희석해서 buffer change를 진행하면 나아지지 않을까 생각하고 이렇게 진행해보려고 하는데 혹시 크게 상관이 없을까요?

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