[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웨비나모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 1712  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Qiagen RNeasy mini kit 사용시 최종 일루션때 뭔가 잔여물이 같이 elute 됩니다...
알딸기스무디(과기인)  |  09.10 13:11

Qiagen 사의 RNeasy mini kit를 이용하여 bacteria RNA를 추출하려고 합니다. Bacteria는 gram negative라 cell lysis에 특이 사항은 없는 것으로 압니다.

 

mercapto ethanol과 DNase도 처리를 했구요, 프로토콜대로 다 따라서 실험을 진행했습니다.

그런데 맨 마지막에 nuclease free water를 넣고 elution 하였을 때 뭔가 하얀 pellet이 자꾸 같이 보입니다.

Lysis의 문제인가 싶어서 RLT 치기 전에 lysozyme도 쳐 봤었는데 똑같이 결과가 나왔구요, pellet을 피해서 용액을 저장하면 농도와 purity가 매우 안 좋게 나옵니다.. 농도 30ng/ul purity는 1.2 정도로요..

pellet은 피페팅을 몇번 하면 녹는 것 같고, 녹은 경우에 농도는 올라갑니다. 하지만 rna가 다 부서져서 도저히 쓸 수가 없는 상태가 됩니다...

 

도대체 뭐가 문제인 걸까요?

#RNeasy mini kit
 
#RNA extraction
 
#Bacteria
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

RNA 추출 시 Cell 양을 너무 많이 하신건 아닌가요? Cell lysis 시에

lysozyme 처리 후 RLT+bME 처ㄹ리 하고 나서 Solution이 맑아지는지 확인 하시구요 column 에 통과 후 ethanol 넣고나서 실타래 처럼 형성되는게 있는지 확인 하시는게 좋을 것 같습니다.

nano drop 도 좋지만 gel에 걸어서 확인도 해보셔야 합니다.

d.w 에 녹아있는 RNA는 절대로 침전되지 않습니당.

Dnase 는 on-column method를 사용하시는지요?

RNA  |  09.11 13:22   

RNA 추출 시 Cell 양을 너무 많이 하신건 아닌가요? Cell lysis 시에

lysozyme 처리 후 RLT+bME 처ㄹ리 하고 나서 Solution이 맑아지는지 확인 하시구요 column 에 통과 후 ethanol 넣고나서 실타래 처럼 형성되는게 있는지 확인 하시는게 좋을 것 같습니다.

nano drop 도 좋지만 gel에 걸어서 확인도 해보셔야 합니다.

d.w 에 녹아있는 RNA는 절대로 침전되지 않습니당.

Dnase 는 on-column method를 사용하시는지요?

RNA  |  09.11 13:22   
Dnase 는 on column식으로 처리합니다. 역시 프로토콜에 있는대로요. Cell양도 줄여는 봤는데 똑같은 현상이 발생했었구요. Rlt, b-mecap 처리시 완전히 투명하지는 않지만 원래의 균액과 비교시 상대적으로 투명하게 변합니다. 에탄올 첨가시에도 rna로 추정되는 아지랑이를 확인할수 있습니다.

혹시 Rlt 처리시 드라마틱하게 투명하게 변해야 하나요?
알딸기스무디  |  09.13 07:58  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[Proteintech] 전품목 할인 행사 !!! (12.9까지)
마크로텍 마크로텍
Ezscope Nikon 현미경 마이크로톰 특가판매 (12.30까지)
엠피바이오메디칼스코리아 엠피바이오메디칼스코리아
샘플파쇄 단 40초! 비드호모게나이저 특별할인행사: 가격할인+사은품 증정 (12.31까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
6/6  좌우
231,000219,000
137,600131,000
180,700172,000
49,700
286,700
130,00065,000
56,70054,000
218,200
121,700
101,90097,000
79,80076,000
668,600334,000
107,200102,000
286,700
82,800
286,700
113,500108,000
123,900118,000
286,700
231,000219,000
144,900138,000
286,700
286,700
50,50048,000
최근등록   더보기 >
DMSO 제거   10.17
손세균 배양 결과 입니다. 분석 바랍니다.   10.17
bacterial biofilm formation, removing bacteria 시에   10.17
Phytagel이 들어간 미생물 혐기배지를 만들었는데 굳지도 않고 색도 이상해요ㅠㅠ   10.17
gDNA 추출시 질문있습니다!   10.17
ELISA 결과분석   10.17
cell cytoplasm 에 발생한 기포 like substance   10.17
Co-IP 프로토콜 및 설명입니다.   10.17
케톤산증과 TCA회로의 연관에 대해 설명해주세요   10.17
천연식물 에탄올 추출시   10.17
국립암센터
투표진행
Q. Protease 혹은 Phosphatase inhibitor를 넣으시나요? 웨스턴을 진행한다 가정을 하고 샘플은 셀에서 RIPA로 lysis를 진행한다할때 여러분께서는 inhibitor를 넣으시나요?
참여하기
Q. 영문교정 맘에드는곳(?) 은 어디였나요
참여하기
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아