실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
Qiagen RNeasy mini kit 사용시 최종 일루션때 뭔가 잔여물이 같이 elute 됩니다...
레벨1 딸기스무디 (과기인)
Qiagen 사의 RNeasy mini kit를 이용하여 bacteria RNA를 추출하려고 합니다. Bacteria는 gram negative라 cell lysis에 특이 사항은 없는 것으로 압니다.
mercapto ethanol과 DNase도 처리를 했구요, 프로토콜대로 다 따라서 실험을 진행했습니다.
그런데 맨 마지막에 nuclease free water를 넣고 elution 하였을 때 뭔가 하얀 pellet이 자꾸 같이 보입니다.
Lysis의 문제인가 싶어서 RLT 치기 전에 lysozyme도 쳐 봤었는데 똑같이 결과가 나왔구요, pellet을 피해서 용액을 저장하면 농도와 purity가 매우 안 좋게 나옵니다.. 농도 30ng/ul purity는 1.2 정도로요..
pellet은 피페팅을 몇번 하면 녹는 것 같고, 녹은 경우에 농도는 올라갑니다. 하지만 rna가 다 부서져서 도저히 쓸 수가 없는 상태가 됩니다...
도대체 뭐가 문제인 걸까요?
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