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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 정말 급해요 ㅠㅠ 전기영동 실패 이유가 뭘까요??
알빨강토마토1(일반인)  | 2019.09.08 01:49

upload_imagePDNA Extraction 이후 PCR 전기영동 했는데 DNA 농도를 nano drop으로 측정했을 때는 꽤 높았고 순도도 괜찮았어요 Ladder 다음부터 1,2,4,5,6번째가 저희 조에서 실험한건데 6번째 빼고는 band가 아예 안나왔어요 

다른조가 실패해서 그 조가 저희 조 남는 젤 well에다 넣었는데 시간이 꽤 걸렸는데 이게 혹시 결과에 영향을 줄까요 ..?

실패 원인을 꼭 알려주세요ㅠㅠ

#전기영동
 
#전기영동 실패 원인
 
#아가로오스 젤
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.09.08   

5번은 양이 적지만 band는 있습니다.

1, 2, 4 lane은 plasmid가 없는데 실패 원인은 여러가지가 있겠지만 plasmid 분리가

안된 것이 가장 큰 원인 아닐까합니다.

알빨강토마토1  |  2019.09.08   

Plasmid가 없다는게 무슨 뜻이죠?? 붕어의 CO1 유전자 사용했어요

대왕개구리SPEED  |  2019.09.08   

plasmid가 아니고 PCR 증폭결과네요.

결과적으로 PCR 증폭이 안되어서 band가 안보이는 것인데 이런 실험 수업에서

발생하는 문제는 여러 사람이 실험하기 때문에 정확한 문제를 알기 어렵습니다.

모두 동일한 DNA로 동일한 시약 및 조건으로 PCR을 해도 잘나오는 조와 안나오는

조가 있습니다.

추출한 DNA는 각 조에서 추출했나요 아니면 추출한 DNA를 모든 조에서 동일하게

사용 했나요?

알빨강토마토1  |  2019.09.08   

각 시료가 모두 다른 붕어에서 시료를 각자 채취했어요

대왕개구리SPEED  |  2019.09.08   

각자 DNA를 분리한것이 아니라 조별로 DNA를 분리한 것이죠?

분리한 DNA는 전기영동으로 확인했나요?

분리한 DNA에 문제가 있을 수도 있고 PCR 반응액 혼합 할 때의 문제도 있을 수도

있습니다.

증폭 조건은 모든 조에서 같을 테니 문제가 없을 것으로 보입니다.

알빨강토마토1  |  2019.09.09   

각자 DNA 채취했고 Nanodrop으로 농도랑 순도 확인해서 DNA 추출에는 문제 없었어요

혹시 전기영동 시작하기 전에 well에 시료 넣는데 시간이 오래 걸리면 결과에 영향을 주나요???

대왕개구리SPEED  |  2019.09.09   

얼마나 시간이 걸렸는지에 따라 다릅니다.

그래도 수업 시간에 시간이 지연된 정도로는 이유가 안될겁니다.

분리한 DNA를 전기영동으로 확인 안했으면 거기에도 이유가 있을수 있습니다. 

 

간장게장  |  2019.09.11    

PCR 재료를 모두 넣고 잘 섞어주지 않으면 PCR이 안 되는 경우도 있습니다.

재료를 tube에 넣고, 뚜껑을 덮고 손끝으로 20번 정도 톡톡 쳐서 혼합해 주세요.

그리고 나서 원심분리해서 tube 아래쪽으로 시료들이 모이도록 한 후에 PCR 기계에 넣어 보세요.

 

뒷다리영빙구  |  2019.09.16   

저..다른건 다른분들이 잘말씀해주셨는데

한가지만 언급하자면 Nanodrop으로 측정했다고 해서 DNA가 잘뽑혔다고는 말하기 힘들듯해요

일반적으로 DNA가 잘 뽑혔다를 판단할때는 gel 전기영동하는게 정석이구요. 물론 Nanodrop을 통해 DNA 양이나 순도등등을 판단을 하지만 Nanodrop자체가 DNA의 유무를 판단하긴 어려워요(단순 흡광도만 보는거라서요^^) 뽑은 plasmid DNA를 전기영동해서 확인해보구 이상없으면 다시 PCR진행해서 봐보는게 좋을듯해요!

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