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5번은 양이 적지만 band는 있습니다.
1, 2, 4 lane은 plasmid가 없는데 실패 원인은 여러가지가 있겠지만 plasmid 분리가
안된 것이 가장 큰 원인 아닐까합니다.
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레벨1
빨강토마토1
(일반인)
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19.09.08 12:25
Plasmid가 없다는게 무슨 뜻이죠?? 붕어의 CO1 유전자 사용했어요
plasmid가 아니고 PCR 증폭결과네요.
결과적으로 PCR 증폭이 안되어서 band가 안보이는 것인데 이런 실험 수업에서
발생하는 문제는 여러 사람이 실험하기 때문에 정확한 문제를 알기 어렵습니다.
모두 동일한 DNA로 동일한 시약 및 조건으로 PCR을 해도 잘나오는 조와 안나오는
조가 있습니다.
추출한 DNA는 각 조에서 추출했나요 아니면 추출한 DNA를 모든 조에서 동일하게
사용 했나요?
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레벨1
빨강토마토1
(일반인)
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19.09.08 18:54
각 시료가 모두 다른 붕어에서 시료를 각자 채취했어요
각자 DNA를 분리한것이 아니라 조별로 DNA를 분리한 것이죠?
분리한 DNA는 전기영동으로 확인했나요?
분리한 DNA에 문제가 있을 수도 있고 PCR 반응액 혼합 할 때의 문제도 있을 수도
있습니다.
증폭 조건은 모든 조에서 같을 테니 문제가 없을 것으로 보입니다.
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레벨1
빨강토마토1
(일반인)
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19.09.09 08:20
각자 DNA 채취했고 Nanodrop으로 농도랑 순도 확인해서 DNA 추출에는 문제 없었어요
혹시 전기영동 시작하기 전에 well에 시료 넣는데 시간이 오래 걸리면 결과에 영향을 주나요???
얼마나 시간이 걸렸는지에 따라 다릅니다.
그래도 수업 시간에 시간이 지연된 정도로는 이유가 안될겁니다.
분리한 DNA를 전기영동으로 확인 안했으면 거기에도 이유가 있을수 있습니다.
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간장게장
(비회원)
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19.09.11 11:18
PCR 재료를 모두 넣고 잘 섞어주지 않으면 PCR이 안 되는 경우도 있습니다.
재료를 tube에 넣고, 뚜껑을 덮고 손끝으로 20번 정도 톡톡 쳐서 혼합해 주세요.
그리고 나서 원심분리해서 tube 아래쪽으로 시료들이 모이도록 한 후에 PCR 기계에 넣어 보세요.
저..다른건 다른분들이 잘말씀해주셨는데
한가지만 언급하자면 Nanodrop으로 측정했다고 해서 DNA가 잘뽑혔다고는 말하기 힘들듯해요
일반적으로 DNA가 잘 뽑혔다를 판단할때는 gel 전기영동하는게 정석이구요. 물론 Nanodrop을 통해 DNA 양이나 순도등등을 판단을 하지만 Nanodrop자체가 DNA의 유무를 판단하긴 어려워요(단순 흡광도만 보는거라서요^^) 뽑은 plasmid DNA를 전기영동해서 확인해보구 이상없으면 다시 PCR진행해서 봐보는게 좋을듯해요!