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질문 sgRNA annealing 관련
알Jerry(대학원생)  |  2019.09.03 14:06

안녕하세요,

제가 Crispr-Cas9 으로 gene editing 을 처음 해 보는건데,

Feng zhang protocol 을 기준으로 진행하고 있는데요,

sgRNA annealing 시에 T4 buffer 와 PNK 를 넣고 37도에서 reaction 시키던데요, 

어느단계에서 hydrogen bond 가 만들어지는건지를 잘 모르겠어서요...

 

ligase는 covalent bond 를 만들어준다고 알고 있는데...

 

PNK 는 끝부분에 phospho lable 을 해주는 역할인것 같고..

T4 buffer 의 ATP가 37도에서 hydrogen bonding 을 boosting 해주는건가요??

 

답변 부탁드리겠습니다.

미리 감사드립니다.

#Crispr
 
#sgRNA
 
#gene editing
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