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질문 단백질 정량 . 흡광도
올챙이sh1227(과기인)  |  2019.08.23 21:50

오늘 단백질 농도 정량을 구하는 것을 처음해 보았습니다.

방법은 1 well당 10 ug/ml  희석시킨 샘플+ BCA 용액 (1:50로 섞은) 100 ul를 넣고
37도에서 10분 incubation 시킨후에 562 nm에서 측정하였습니다.

 


첨부 이미지

 

그래서 나온 흡광도값을 standard curve에서 얻은 직선방정식에 대입하여서 단백질량을

구했습니다.

 

그리고 샘플 ABCD의 평균을구한후 y값에 대입해 농도를 구했습니다.


제가 한 방법중에 잘못된 부분이 있나요?

그게 아니라면 해결방법좀 알려주셨으면 합니다ㅜㅜ

부탁드립니다.

#단백질 정량
 
#흡광도
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.08.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

계산된 방정식 Y값에 OD값을 대입시켜 농도 X 값을 구하면 됩니다.

잘못한 부분이 없는 것같습니다.

그러나 근본적으로 standard curve의 r^2값이 너무 않좋습니다.

0.999정도는 아니어도 0.99 이상 나온 값을 가지고 계산하는 것이 정확합니다.

올챙이sh1227  |  2019.08.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
standard curve의r^2값을 좋게하기위해서는 어떻게 해야하나요?
대왕개구리SPEED  |  2019.08.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

피펫팅을 더욱 정확히 하는 것이 가장 좋을 듯 합니다.

알현미루  |  2019.08.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

STD curve의 r^2값 은 1에 수렴할정도로 가까울지언정, 각 값이 의미하는 위치가 상당히 불안정해보이는 데이터같아보입니다. 윗 분의 말씀대로 파이펫팅에 더욱 주의를 쏟고, serial dilution시에 파이펫팅은 더욱 주의가 필요하다고 생각합니다.

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