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레벨5
지나가는사람
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19.08.23 15:48
보통 자극은 2hr~4hr 정도로 줍니다.
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레벨1
연규조
(대학원생)
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19.08.23 16:51
24시간 이내로 자극해도 t cell subset으로의 differentiation을 확인할 수 있나요?
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레벨5
지나가는사람
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19.08.23 17:09
그리고 CD3, CD28로 자극준다하셨는데,
저의 경우 T cell을 분화시키기위해
LN 를 MACS or Aria로 sorting 후에 naive T cell만을 얻습니다.
그리고, culture 전날에 CD3/28 을 96 well에 coating ( O/N ; 14~16 시간 )을 합니다.
그리고 다음날 PBS 로 2 wash 해주고 원하는 분화 조건에 따라 분화를 시켰습니다.
주로 TH1, TH2, TH17, 그리고 iTreg 으로 유도시켜 실험을 진행하였습니다.
그리고 염증관련해서 자극을 줄때 PMA/Ionomycin 을 4~6시간 처리하여 염증성 cytoin Ab를 이용하여 확인하였습니다.
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레벨1
연규조
(대학원생)
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19.08.24 00:33
네 감사합니다. 그런데 72시간 이상 자극하는 건 다른 이유가 있을까요..?? FACS로 cell phenotype 보는 것 역시 4시간 정도 자극 후에 진행해도 차이가 확실히 있을까요??
관찰하시려는 T cell subsets가 CD4 T cell subset이라는 가정하에 답변드리면,
CD4 T cell 분화를 시킬 때는,
Treg/Th17 세포는 2~3일
Th1/Th2 세포는 3~5일 정도 CD3/CD28으로 자극을 줍니다.
분화된 세포를 확인하기 위한 stimulation을 할 때에는 (cytokine production),
3-5 시간으로도 충분합니다.
FACS를 통해서 cytokine을 측정하기 위해서는 Golgi stop을 처리하여야 intracellular staining을 통해 확인할 수 있습니다.