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질문 percoll 수행시 문제점이 있습니다.
알홍정원(과기인)  |  2019.08.20 18:18

실험방법중 질문드립니다.

제가 human blood 에서PBMC와 neutrophil을 동시에 분리하려고 하는데

74% percoll(percoll 7.4ml + 10xPBS 1ml+DW 1.6ml)과 55%  percoll (percoll 5.5ml +

10xPBS 1ml+DW 3.5ml)

을 만들어서 순서대로  tube에 overay후 blood 원액 넣고 350g에 20분 실온에서

centrifuge하는데 PBMC는 층이 분명하게 생기는 반면에 neutrophil층은 잘 안보이

네요....그리고  RBC가 바닥에 가라앉아야 됨에도 불구하고 가라 않지 않고 살

짝 떠 있는것 처럼 보입니다...

무엇이 문제인지 도통 모르겠습니다.

경험있으신 분들의 조언 부탁드립니다.

#percoll
 
#neutrophil
 
#RBC
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.08.20   

gradient %는 연구자에 따라 약간씩 다릅니다.

57% / 67%로도 가능하며 원심력이 조금 부족한것 같습니다.

400g ~ 700g 까지 30분정도 원심분리하면 분리가 좀더 잘 될겁니다.

개구리A'ANE  |  2019.08.23   

Percoll은 농도조절은 사용자가 직접해야되서

 

그냥 상용품을 사용하시는건 어떤가요? Axis-shield에 Polymorphonuclear cell과 Mononuclear cell을 한번에 분리하는 제품이 이미 있습니다(http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=13)

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