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질문 pcr negative 밴드가 계속 뜨네요
알옥자씨(일반인)  |  08.19 11:35

지금 사용하고 있는 실험실이 거의 1년간 아무도 관리 안하고 방치하던 실험실입니다. 그러다가 제가 3주 전부터 맡아서 PCR을 담당하고 있는데요. 

2주 전까지만 해도 PCR 밴드도 잘나오고 시퀀싱 결과도 좋게 나왔습니다.

그런데 열흘전부터 계속 네가티브 컨트롤에서 계속 밴드가 뜨네요...

물도 바꾸고, 프라이머도 바꾸고 팁도 다시 다 멸균 돌리고 했는데도 너무 뚜렷하고 네가티브가 뜨니 의문입니다.

그래서 PCR기계를 A와 B에 각각 똑같은 환경으로 돌렸는데

A는 네가티브 4개 넣은 것에서 4개 모두 밴드가 뜨고

B는 네가티브가 안뜨네요. 

근데 B에 PCR을 돌리면 계속 DNA밴드가 안나오거나 튜브 뚜껑이 계속 오픈되는 상황이 나오고...

PCR기계 때문에 negative가 뜰 수도 있는 건가요?? 그리고 저런 경우라면 수리를 맡겨야 하는건지 점검을 받아야하는건지 조언 좀 부탁드립니다.

#PCR
 
#DNA
 
#프라이머
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

코튼플러그가 삽입된 팁만 사용해도 이런 현상을 줄일 수 있습니다.

대왕개구리강시  |  08.19 11:55  

근데 B에 PCR을 돌리면 계속 DNA밴드가 안나오거나 튜브 뚜껑이 계속 오픈되는 상황이 나오고...

 

Stripe type 의 PCR tube를 사용하시나요?

PCR tube 한 줄만 PCR 기계에 넣어서 진행하면 기계 뚜껑에 눌려서

tube cap이 일그러지고 반응액이 증발하고 따라서 PCR 반응이 일어나지 않습니다.

PCR tube를 두 줄 또는 세 줄을 넣어서 진행해 보세요. 

실험자  |  08.20 11:29   
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