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질문 western blot band가 일정하지가 않아요 loading도 제대로 한것 같은데 왜 그럴까요?ㅠ
알Pika(대학원생)  |  08.19 11:34
첨부파일 파일첨부: 1.jpg (29 KB)
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western blot시 beta actin 대신 GAPDH를 보았는데 band마다 진하기도 일정하지 않고 다른 band도 보입니다. 왜 그럴까요?ㅠ 아무리 생각해도 어떤 부분에서 문제가 생긴지 잘 모르겠습니다.

#western blot
 
#band
 
#농도
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

웨스턴을 하기 전에 그냥 SDS-PAGE를 쿠마시염색을 해 보세요.

쿠마시 염색으로 각 샘플의 단백질 양을 확인하고 보정한 다음. 다시 한 번 더 SDS-PAGE하고 쿠마시 염색을 해서 각 lane에 건 샘플의 밴드 intensity가 같은 것을 확인하는게 좋습니다.

그냥 로우리법 등으로 단백질 정량만해서 젤로딩하는것보다는 트러블슈팅이 편합니다.

 

*실험 각 단계마다 확인하고 갑시다*

대왕개구리강시  |  08.19 11:45  

쿠마시를 할 수 없는 경우는 어떻게 해야 할까요?

알Pika  |  08.19 12:24  

쿠마시 염색을 안하면 밴드의 상태와 양을 알기가 어렵습니다.

정 안되면 membrane에 transfer 한 다음 Ponseau S 염색을 해서 볼 수는 있지만 ....

대왕개구리강시  |  08.19 16:14  
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