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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 pBABE-puro vector에 Cloning해서 sequencing 까지 확인했는데 발현이 안되네요ㅜㅜ
알Mangop(대학원생)  |  08.16 23:51

답답한 마음에 여기에 질문해 봅니다.

pBABE-puro vector에 제 target을 Cloning하여 

enzyme cutting과 sequencing확인을 통해 insert가 잘 들어간 것을 확인했습니다.

당연히 잘 발현하겠거니 하고 viral packaging도 하고 infection후에 puro selection해서 Western blot으로 확인해 보니 전혀 발현이 안되었습니다ㅠㅠ

그래서 다시 pBABE-puro-insert plasmid를 HEK293cell에 transfection시켜 보았더니 control 과 전혀 차이가 없었구요...ㅠㅠㅠ

 

Troubleshooting을 전혀 할 수가 없어서 다시 cloning 중인데 이번에는 cloning도 되지를 않아 너무 답답합니다.....

 

무엇이 문제일까요?ㅠㅠ

#Clonging
 
#pBABE
 
#발현
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