실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
도움을 부탁드려요!! ㅠㅠㅜ RT-PCR (reverse transcription PCR) 결과와 realtime PCR의 결과가 일치하지 않을수 있는가요??
레벨1 사브레 (대학원생)
안녕하세요 ! 저는 모 대학에서 석사과정 중인 학생입니다.
3T3-L1을 이용하여 약물을 처리한 후 웨스턴블랏과 RT-PCR, realtime PCR로 결과를 확인하는 중인데요,
웨스턴블랏에서 약물을 처리하였을 때 감소하는 결과를 얻었고 RT-PCR에서는 줄어들지 않는 결과를 얻었으나 realtime PCR에서는 웨스턴 블랏처럼 줄어드는 결과를 얻었습니다.
제가 궁금한 부분은, 'RT-PCR (reverse transcription PCR) 결과와 realtime PCR의 결과가 일치하지 않을수도 있는가?'라는 점입니다. 두 실험 모두 같은 cDNA를 사용하였고 다른 점이라면 사용한 cDNA의 농도 뿐인데 이것은 영향을 미치지 않는 것 같습니다. (RT-PCR에서 사용한 cDNA농도의 절반 농도를 realtime PCR 에 사용하였습니다!! realtime PCR 할 때의 final concentration 때문....)
그래서 realtime PCR에서는 줄어들었던 샘플을 well에서 따서 다시 아가로즈겔에 전기영동을 해보았더니 RT-PCR의 결과와 같은 방향으로 줄어들지 않는다는 결과가 나왔습니다.
realtime PCR의 결과를 믿어야 할까요 RT-PCR의 결과를 믿어야 할까요...?
아니면 이런 상황에서 제가 다시 체크해 볼 수 있는 방법이 있을까요??
혹시 제가 하는 realtime PCR의 데이터 처리 과정에 문제가 있는걸수도 있을까요...?
도움을 부탁드려요!
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