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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 sds page band가 안보이는 현상
알수바기(대학생)  |  08.16 09:59
첨부파일 파일첨부: KakaoTalk_20190816_094501760.jpg (69 KB)
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안녕하세요?

protein purification전에

expression의 확인을 위해서 empty vector와 target protein을 같이 sds page로 확인해 보았습니다.

ladder옆에 빈 공간 1,2,3번이 empty vector인데 1번은 sonication후에 centrifuge하기 전 2번은 centrifuge후 supernatant를 3번엔 pellet을 buffer로 희석시켜서 staining하여 loading 하였습니다.

4,5,6/7,8,9은 각각 target protein이고 이것들 또한 위 조건과 같이 진행하였습니다.

총 3번정도 시행하였는데

제가 샘플은 혼동하여서 잘못 loading 하였거나, cell 농도가 적어서 안보이나 싶어서 확인까지 하면서 했는데 3번째에도 같은 결과가 나왔습니다.

 

샘플 loading은 ladder를 제외하고 각 12ul씩 걸었는데 혹시 sample loading 양을 높여야 하나요? 아니면 다른 문제가있는 것인가요?

#SDS-PAGE
 
#protein expression
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① 염색 과정에서 생길 수 있는 background 없이 재현성 있는 결과 획득이 가능 ② Gel 제작 시간을 줄여 전체 실험 시간 단축 ③ 미량의 단백질까지 검출 가능 (0.2 ng)
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

1,2,3 번 lane에 잘 보면 밴드가 있습니다.

결국 loading 양이 적어서 밴드가 안보이는 것 같습니다.

무슨 실험이든 하려면 시료의 양을 확인하면서 하는 것이 좋습니다. 12ul 라고 하지만 그 속에 얼마나 많은 단백질이 들어있는지 알지 못하면 안돼죠.

시료가 준비되면 단백질 정량을 해 보세요.

정량한 값을 기초로 각 well에 같은 양의 단백질을 걸면 비교적 보기 좋은 밴드 패턴이 나올겁니다.

대왕개구리강시  |  08.16 11:21  
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