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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 rawcell좀 봐주세요 ㅠ
뒷다리시은(대학원생)  |  08.15 20:43

upload_image

 

혹시 이 rawcell상태가 activation이 된건가요?

다른회사의 배지로 키우고 있는건 그냥 동글동글한데

저희가 원래 쓰던 배지로 키우던건 조금씩 더 삐죽해지더리 저렇게 모양이 좀 변했습니다...

 

배지는 회사와 사용하는 FBS의 inactivation과정의 차이외에는 없습니다 ㅠㅠ

 

rawcell키울 때 FBS의 inactivation이 중요한가요?

#raw
 
#FBS
 
#inactivation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

정상적으로 보입니다.

그리고 저번에도 답을 했지만 raw cell 모양만으로 자극되었는지 알수는 없고

사이토카인 등 지표성분 분석을 해봐야 알수있습니다.

흔히 아무런 물질을 처리하지 않아고 raw cell이 길게 뾰족하게 자라면 자극이

된걸로 아는데 이때 지표 성분 분석해보면 base line 정도 나옵니다.

저번에 배지를 바꿔서 실험해보는 걸 추천 드렸는데 지금 사용하는 배지로

실험하면 좋을 듯 합니다.

참고로 Raw cell에 아무런 자극을 주지 않고 키우면 아래와 같은 세포 모양이

나오는데 길고 뾰족하게 자라는 것은 정상적인 세포 모양입니다.

upload_image

대왕개구리SPEED  |  08.15 21:27  
답변감사합니다.
거듭해서 질문을 드렸던 이유중에 하나가 저렇게 모양이 변한 세포로 lps처리후 no측정을하면 컨트롤과lps처리군과의 차이가 나지않을정도로 컨트롤에서 no발현이 나왔기때문입니다. 동글동글한세포로 실험을했을때는 컨트롤이 0에가까운 수치를 나타냈구요.,
그래서 배지, FBS, LPS, 제 셀 컨트롤에대한 문제에대해 찾아보는 중이였습니다..
이점에대해서는 제가 기술하지 않았었네요..ㅠ
뒷다리시은  |  08.16 08:56  

지표를 측정해서 높게 나왔다면 문제있습니다.

그런데 세포 모양이 변했다고 100% 지표가 올라가는 것은 아닙니다.

문제가 해결되었으니 배지를 변경해서 실험하면 될 것 같습니다. 

대왕개구리SPEED  |  08.16 10:10  

시은님 안녕하세요! 

저도 Raw 264.7cell에 LPS 자극을 주어 NO생성량 측정하는 실험을 셋팅중에 있습니다.  시은님 처럼 LPS를 자극하지 않은 Raw264.7 cell에도 많은 양의 NO가 감지되어 지금 어떤게 문제인지 찾고있습니다. 

혹시 시은님 실험 성공하셨을때 사용한 배지 회사와 조성 알 수 있을까요? 

답변 주시면 감사하겠습니다!

알gmldi12  |  08.16 11:14  
최근에 다시실험한 것에서는 좋은결과를 얻었습니다.

먼저 새롭게 rawcell을 받은 다른실험실에서 사용하는 제품은 모두 gibco의 DMEM FBS PS입니다. 저희실험실은 Hyclone dmem welgene fbs gibco ps를 사용하고있고요 10퍼fbs 1퍼 ps로만들어사용했습니다

옆실험실은 배지제작시 FBS를 56도에 30분 inactivation하였고 저희 실험실은 하지 않았습니다.
배양을 계속하다보니 제가 rawcell다루는데 익숙치 않아서 생기는 문제도 더러있었습니다.
파이펫팅보다 스크래퍼로 살살긁어내는것과 요즘은 pbs로 워싱하는거대신 그냥 배지로 워싱하고있습니다
또 셀다운시에도 700-800rpm으로 진행하고있습니다.
저렇게 진행한이후 저희 배지에서도 activation되는게 줄더군요 대신 계대를 5번전후로 진행하니 또 삐죽해지는게 보여서 stock을까고 5,6번이내에 실험하는게 좋을듯합니다.
뒷다리시은  |  08.17 21:02  
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