실험 Q&A Immunology > Immunofluorescence
flow cytometry(유세포분석)을 위한 cell fixation
레벨1 Yeoney (대학원생)
안녕하세요. mouse에서 추출한 BMDM (Bone-marrow derived macrophage) 세포로 ex vivo 실험을 계획하는 데 도움이 필요해 질문 드립니다.
대퇴부 골수에서 추출한 세포를 culture plate에서 배양한 뒤, LPS, IL-4, IL-13으로 각각 M1, M2 macrophage로 분극화 후 cell을 회수하여 형광 antibody 염색 후 flow cytometry로 분석할 예정인데,
문제는 필요한 antibody가 구입에 시간이 걸려 분극화 후 cell을 fixation한 뒤 antibody가 도착했을 때 staining 및 유세포분석을 해야하는 상황입니다.
그래서 paraformaldehyde fixation protocol을 참고하여 실험을 준비하고 있는데, 대부분 staining 후 fix가 이루어지는 방법이라서,
cell을 먼저 고정한 뒤 staining을 진행해도 될지 참고 의견을 구합니다. 혹시 비슷한 경험이 있으신 분들의 도움 부탁드립니다. 감사합니다.