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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 gDNA로 PCR을 계속 진행하는데 결과가 나오지않습니다.
알핳귀찮아(대학원생)  |  2019.08.13 15:48

안녕하세요.

제 주변에 물어볼 선생님들이 없어서 여기에 질문을 드립니다.

 

일단 제가 cell에 DNA type virus를 infection 시킨 후에 

 gDNA extraction kit를 사용하여 gDNA를 추출하였습니다.

2xTaq mix, primer(10 pmole), liution buffer, 20ng gDNA를 혼합하여

RT-PCR을 진행하였습니다.

primer 같은 경우에는 논문을 찾아서 디자인하였습니다.

pcr band를 전기영동으로 확인하였을때 band가 계속 관찰 되지않아서

annealing 온도가 안 맞아서 안되나 싶어서 touchdown pcr을 진행하였습니다. 

이 방법을 사용해서 진행하였을때도 band가 나오지않아서 막막합니다.

왜 band가 관찰되지 않는건가요...

 

#virus infection
 
#PCR
 
#genomicDNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
실험자  |  2019.08.14    

PCR target가 virus DNA라는 가정하에

 

우선 genome DNA로 PCR이 잘되는 primer를 구해서 PCR product를 확인한다.

: 시약에대한 검증

 

시약에 문제가 없으면 분리한 gDNA에 virus DNA가 너무 적을 가능성이 예상됩니다.

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