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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
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질문 너무 간단한 문제인데 질문 드리는건 아닌지 모르겠습니다..
알버그기(일반인)  |  08.12 16:58

안녕하세요.

너무 간단한 문제일지도 모르겠지만 몇가지 궁금한 것이 있어서 용기내어 여쭙습니다...

1. 저희 연구실에서 최근 competent cell을 하나 구입하였는데요. 'electrocompetent cell'이라고 쓰여있습니다.

이러한 cell은 일반적으로 사용하는 heat-shock 방법으로는 transformation이 안되나요? 아마도 CaCl2 처리가 안돼있으니 안되겠죠....?

그렇다면 이 cell들을 일부 컬처해서 CaCl2 처리를 하면 일반적인 방법으로 사용이 가능한가요 ?

2. DH5a에 transformation 시켜서 amplification한 plasmid가 DNA modification이 일어나는 경우가 있나요? methylation 같은거요 ... 시퀀싱 하면 plasmid 시퀀스는 멀쩡한데 원하는 enzyme으로 cut이 안돼서요 ㅠㅠ

 

쑥쓰러울정도로 기본적인 질문인 것 같지만 고수님들, 선배님들의 소중한 의견을 부탁드립니다..감사합니다!!

#competent cell
 
#transformation
 
#restriction enzyme
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 어떤 균주 인지를 알려주셨다면 답변이 더 쉬웠을 것 같습니다. 실험실에서 유전자를 다루는 목적으로 일반적으로 사용하는 대장균을 말씀 하시는 것이면 고체 배지에 1~2회 긁어서 single cell isolation 후 알고 계시는 C.P. cell 제작 방법에 사용하시면 됩니다. 바로 액체 배양으로 가는 것은 추천드리지 않습니다. 

 

2. 어떤 제한효소를 사용하시는지 알려주셨다면 이 또한 답변이 쉬웠을 것 같습니다. 먼저, 제한효소의 상태, 유전자(plasmid) 상태 등 실험적으로 고려할 사항을 더 점검해 보시는 것이 좋을 것 같습니다. 

알호동곰  |  08.12 17:44  

compatible cohensive end을 이용해서 ligase시킨 경우는 다시 자르면 잘리지 않습니다. 

예를 들어 vector에 xhoI으로 집어넣으려고 하는데 GOI 안에 xhoI이 있다면 enzyme site를 salI으로 바꿔서 GOI를 잘라주고 vector에 ligation을 시켜주면 vector에 원하는 gene을 집어 넣을수 있습니다. 하지만 이 후론 xho/sal 모두 잘려 나오지 않게됩니다. 

혹시 plasmid를 받아 오신것이라면 이것도 한번 확인해 보세요. 

개구리bio  |  08.15 08:04  
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