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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 one step rt-qpcr slope...
알졸업좀..(대학원생)  |  08.06 17:09
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안녕하세요~

 

제가 one step rt-qpcr실험중에 있는데요.. standard curve 작성에 있어서 R^2값은 얼추 1에 가까이 나오는데 조건을 조금씩 바꿔봐도 slope와 효율값이 신뢰수준 가까이 안미치네요ㅜㅜ 어떤 조건을 바꿔주는게 좋을까요??

실험 조건은 초기 시료를 1:5로 5번 dilution하여 3반복으로 하였고 product는 220bp정도이고 primer는 3uM 농도로 사용중입다.

PCR조건은 48도 30min, 95도 10min, Cycle 95도 15sec, 60도 1min으로 진행중이고 프라이머 농도도 높혀보고 cycle도 3step으로 바꿔서 해보았는데 기울기 값이 -3보다 더 멀어지기만 하네요..

#qpcr
 
#standard curve
 
#slope
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