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 전체 > Molecular Biology-RNA > mRNA Analysis
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질문 Real-time PCR 할 때 Phospho form detect에 관하여 질문드립니다.
알SSacred(대학원생)  |  2019.08.02 16:18

안녕하세요.

저희 연구실 내 연구원님으로부터 한 가지 들은 이야기가 있어서 조사해보다가 도저히 이렇다 할 답안을 찾지 못하여 고수님들께 여쭙고자 합니다.

현재 Real-time PCR 기법을 사용하여 특정 primer의 mRNA expression level을 보고 있는 중인데요.

연구원님 말씀으로는 PCR을 할 때 사용하는 primer로는 Non-phospho form은 측정이 가능하나 Phospho-form이 붙은 primer는 측정이 안된다고 하셨어요.

Phospho form의 양이 primer마다 차이는 있겠으나 Non-phospho form보다 존재하는 양이 매우 극소량이라 PCR로는 Detect가 어려워서라는 말씀을 해주시기는 했습니다.

인터넷과 논문 찾아가면서 왜 PCR로는 Phospho form은 Detect를 하는 것이 어려운지를 찾아보는데 이렇다 할 답변을 찾지 못해서 여기에 질문 올립니다.

고수님들의 명쾌한 답변 부탁드립니다.

 

긴 글 읽어주셔서 감사합니다!

#Real time PCR
 
#mRNA expression
 
#Phospho form
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2019.08.02   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

PCR은 cDNA의 양을 측정하는 방법입니다.

실험자의 phospho 폼을 보려는 것은 단백질 발현이후 인산기의 유무를 확인하는 실험입니다.  때문에 가장 많이 이용하는 방법은 western blot입니다.

제가 아는선에서는 두 시험은 같지가 않습니다.

대왕개구리SPEED  |  2019.08.02   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

부가적인 설명을 하면 phospho +/- form의 유전자 구조는 동일합니다.

단백질에서 일어나는 변화이기 때문에 PCR로는 그 차이를 알수가 없습니다.

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